Faculdade de Medicina da Universidade Federal da Bahia

Faculdade de Medicina da Universidade Federal da Bahia Citometria de fluxo Com material obtido em parte da: Purdue University Cytometry Laboratories (http: //www. cyto. purdue. edu/flowcyt/educate/pptslide. htm) Agradecimentos: • Dr. Robert Murphy, Carnegie Mellon University, Pittsburgh, PA • Dr. J. Paul Robinson, Purdue University Cytometry Laboratories Dr. Carleton Stewart, RPCI Laboratory of Flow Cytometry, Buffalo, NY • B. H. Davis, William Beaumont Hospital, Royal Oak, Michigan

O que é a citometria de fluxo:

Avaliação de sub-populações celulares: quadrantes CD 4 e CD 8. 2 2% 1 10 100 45% 27% 3 26% 4 . 1 Log PE Fluorescence (CD 4) 1 . 1 1 10 100 Log FITC Fluorescence (CD 8) 1000

Avaliação de ativação celular: explosão respiratória. DCFH-DA DCFH DCF H 2 O 2

Análise de divisão celular. G 2 M G 0 DNA Analysis G 1 s G 0 G 1 C o u n t s 0 200 400 2 N G 2 M 600 4 N 800 DNA content 1000

150 75 0 Counts 225 300 Análise de DNA 0 200 400 2 N 600 800 4 N PI Fluorescence 1000

Influxo de cálcio Stimulation 0 36 72 108 Time (Seconds) 144 180

Análise de reticulócitos RMI = 34 RMI = 0 R 4 R 3 R 2 R 1 . 1 1 10 100 log Thiazole Orange R 4 R 3 R 2 R 1 1000 . 1 1 10 1000 log Thiazole Orange

Citômetro de fluxo Computer System Detector & Mechanical Fluidics

Célula de Fluxo Injector Tip Fluorescence signals Focused laser beam Sheath fluid

90 Degree Light Scatter Laser FALS Sensor 90 LS Sensor

Detectores de fluorescência FALS Sensor Fluorescence detector (PMT 3, PMT 4 etc. )

Marcadores fluorescentes Wavelength 400 nm 500 nm 600 nm Excitation Emission Fluorescein (FITC) 700 nm

Cromógenos Common Laser Lines 350 300 nm 457 488 400 nm 514 500 nm 610 600 nm 632 700 nm PE-TR Conj. Texas Red PI Ethidium PE FITC cis-Parinaric acid

Imunofenotipagem: marcação celular CD 4 CD # = cluster designation number CD 2

Imunofenotipagem . 1 1 10 Log FITC 1000

Light scatter gating Side Scatter Projection Neutrophils Scale 1000 200 100 50 40 Monocytes 30 20 15 Lymphocytes 8 0 200 400 600 800 90 Degree Scatter 1000

Avaliação de sub-populações celulares: quadrantes CD 4 e CD 8. 2 2% 1 10 100 45% 27% 3 26% 4 . 1 Log PE Fluorescence (CD 4) 1 . 1 1 10 100 Log FITC Fluorescence (CD 8) 1000