Extendido de Sangre Perifrica Frmula Leucocitaria Un frotis

Extendido de Sangre Periférica Fórmula Leucocitaria

Un frotis bien hecho… • Proporcionar una valiosa información con respecto a la salud del paciente. • Se pueden obtener muchos datos.

Obtención de la muestra • Muestra con EDTA • Sin aditivo o anticoagulante, directamente del dedo o talón, o simplemente de la jeringa.

Muestras con EDTA • Generalmente las muestras que se reciben están con EDTA • Un frotis de sangre con EDTA de buena calidad se puede realizar hasta 2 a 3 horas después de la extracción. • La ventaja es que no hay que hacerlo inmediatamente, y se pueden realizar varios extendidos. • Se pueden contar fácilmente las plaquetas.

Muestra sin anticoagulante • Las punciones digitales y del talón o directamente de la jeringa. • Se deben realizar inmediatamente. • La desventaja es que puede hacerse un Nº limitado de extendidos • Pero si se realiza de la manera correcta y en el tiempo establecido la morfología y distribución deben ser adecuadas.

Extendido • Técnica Manual con dos portaobjetos en ángulo 1. Se coloca 1 gota se sangre en un extremo del portaobjeto (el tamaño de la gota es muy importante) 2. El portaobjeto extensor se sostiene con firmeza en un ángulo de 30 a 45º y se coloca delante de la gota. Luego se lleva un poco hacia atrás hasta toca la gota de sangre, dejando que esta se esparza a lo ancho del portaobjeto. 3. Se empuja con rapidez y suavidad hacia delante hasta el final del portaobjeto, y esta hecho el extendido

• Un movimiento demasiado lento, produce una mala distribución, porque las células mas grandes (granulocitos y monocitos) van a los bordes laterales. • Es fundamental mantener el ángulo a lo largo del extendido. En ciertos casos se debe aumentar el ángulo y en otros reducir, pero mantenerlo a lo largo del frotis. • En los casos de policitemia o en los recién nacidos el ángulo debe reducirse para evitar que el extendido salga corto y grueso. En los casos de hematocrito muy bajos este debe aumentarse de lo contrario el extendido saldrá demasiado largo y fino

CARACTERISTICAS DE UN EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA BIEN PREPARADO. • debe cubrir 2/3 o ¾ partes de la longitud del portaobjetos • debe tener forma de dedo, muy ligeramente redondeado. • debe ser parejo, sin irregularidades, agujeros ni estrías. • Debe tener una cabeza, un cuerpo y una cola. • toda la gota debe estar incluida en el extendido

Secado de los extendidos • Deben secarse tan rápido como sea posible para evitar los artefactos que produce el secado lento. • No se debe soplar para secar porque la humedad de la respiracion artefacta los hematies. • Es conveniente usar un ventilador, y no aire caliente(secador) porque hace que los hematies aparezcan como crenados, tambien la humedad. • Una vez seco el extendido se debe identificar.

Tinción • Tinción pura de Wright Se basa en la utilización de eosina (colorante ácido), azul de metileno (colorante básico) y derivados del azul de metileno (metiltionina) responsable de la coloración púrpura de la cromatina leucocitaria y de ciertas granulaciones citoplasmáticas denominadas azures. • Tinción May-Grünwald - Giemsa • Se usan dos colorantes: • May-Grunwald: que diferencia y tiñe las sustancias acidófilas (color rojo) y las basófilas (color azul). • Giemsa: tiñe la cromatina y gránulos azurófilos.

Tinción de Wright • Se coloca el colorante sobre el extendido cubriendo por completo de 2 a 3 minutos. • Luego se coloca el buffer(agua). Se soplar suavemente para que se mezclen. • Si la mezcla es correcta debe aparecer un brillo metálico en el portaobjeto. La mezcla se deja 3 a 5 minutos o mas • Luego se elimina toda la mezcla con un chorro de agua • Se limpia la parte de atrás del portaobjetos para eliminar residuos del colorante • Se deja secar en posición vertical. • En los extendidos de médula ósea los tiempos deben prolongarse x el mayor número de células existentes.

Examén de los extendidos • Con aumento de 10 x – No es necesario perder mucho tiempo con este aumento pero se puede evaluar la calidad global del extendido, el color y la distribución de las células. Una cantidad desproporcionada de las células grandes, vista en cualquiera de los bordes puede indicar que el extendido está mal hecho. – La formación de rodillos o aglutinación de glóbulos rojos(rouleaux) es fácil reconocer con este aumento. – Por último puede revisarse con rapidez en busca de cualquier célula anormal grande como blastos o incluso parásitos inesperados.

• Con aumento de 40 x – Con este aumento se selecciona la zona del extendido en la que se debe empezar el recuento diferencial y evaluar la morfología. Para ello se selecciona un área donde los eritrocitos esten mayormente separados entre sí, en esta zona se puede hacer una aproximación en el numero de leucocitos total, contando los leucocitos que se encuentren en 10 campos, luego hacer un promedio y el resultado multiplicar por 2000. Por ej. Si en 10 campos se determinan q hay 4 a 5 leucocitos por campo, la estimación del recuento sería 8000 a 10. 000 /mm 3. Esta técnica puede ser muy útil para un control de calidad interno

• Con el objetivo de inmersión en aceite 100 x – Se realiza la formula Leucocitaria. – Se cuentan 100 leucocitos diferenciando en cuanto a morfología y se informa en porcentaje. – Si están presentes se informan las anomalías de los leucocitos, como granulaciones tóxicas, linfocitos reactivos etc. – Se deben observan morfología de plaquetas así como de hematíes. (hipocromia, poiquilocitosis y anisocitosis)

Plaquetas • Se realiza en el objetivo 100 x, en una zona en donde los eritrocitos apenas se toquen entre sí. • Se cuentan en 10 campos la cantidad de plaquetas encontradas. El total de plaquetas se multiplica por 2000 y ese resultado es el numero aproximado de plaquetas /mm 3, por ejemplo si encuentro 12 a 15 x campo en 10 campos serían 120 a 150 y por 2000 el resultado daría 240. 000 a 300. 000/mm 3. Nº de plaquetas encontras x 2000: Rango de referencia: 150. 000 a 400. 000 /mm 3 Por ejemplo: Nº plaquetas encontradas: 152 x 2000: 304. 000 /mm 3

Células que se pueden encontrar normalmente en un extendido de sangre periférica.

Neutrofilos: miden de 10 a 15 micras. -Tienen un núcleo multilobulado, con 2 a 5 lóbulos, fuertemente basófilo. - Citoplasma es eosinófilo claro, en el cual podemos observar los gránulos que se tiñen colorantes neutros, no se observan por ser muy pequeños. Linfocitos: Se pueden encontrar de distintos tamaños, grandes, medianos y pequeños. Si encontramos linfocitos de tamaño mayor observaremos el núcleo desplazado hacia la periferia, mayor cantidad de citoplasma y algunas granulaciones azurófilas.

Eosinófilos: tienen un tamaño similar al de los neutrófilos, pueden ser a veces un poco mas grandes. El citoplasma presenta gran cantidad de granulaciones gruesas acidófilas, que lo cubren totalmente, dejando libre el núcleo. Este presenta en general dos lóbulos. Basófilos: es el menos abundante(1%). El diametro promedio es de 10 micras. Presenta en su citoplasma granulaciones basófilas muy gruesas, que cubren casi por completo el núcleo.

Monocitos: Si encontramos linfocitos de tamaño mayor(15 – 20 micras) observaremos el núcleo desplazado hacia la periferia, mayor cantidad de citoplasma y algunas granulaciones azurófilas. Su citoplasma es menos bàsofilo que el del linfocito a veces grisaceo y con algunas granulaciones azurófilas. Pueden presentar vacuolas en su citoplasma.

Plaquetas: son framentos de citoplasma de megacariocitos, que circulan en sangre periférica. En promedio, tienen un diámetro entre 1 a 4 µm, se tiñe azul claro a púrpura y es muy granular. Su duración en circulación es de 10 a 11 días

Como informar • Generalmente se sigue este orden… - Globulos Rojos: Hematocrito o Volumen Globular Volumen Plasmático Hemoglobina Globulos Blancos Indices Hematiméticos Formula Leucocitaria Observaciones Cada una de las pruebas con su Rango de Referencia correspondiente a la edad del paciente

Reticulocitos • eritrocitos inmaduros • existen en la sangre en una proporción de cinco a diez por mil hematíes. • levemente mas grande que los demas hematíes • Contienen una pequeña cantidad de ARN (ribosomas) formando un retículo granulofilamentoso observable al ser teñido con colorantes llamados supravitales.

• debe realizarse a partir de sangre total con anticoagulante (EDTA) y a ser posible, dentro de las 24 primeras horas de la extracción cuando la sangre se conserva a temperatura ambiente. • Si se mantiene a 4º C, el recuento puede realizarse hasta 48 horas después de la extracción.

• Se coloca cantidades iguales de sangre y colorante en un tubo. • Se incuba a Tº ambiente 10 minutos o a 37ºC 5 minutos. • Se realiza un extendido de esa mezcla • Se deja secar. • Se observa a 100 X

• Se cuentan 10 campos en los que se supone si están distribuidos homogeneamente se tienen 100 hematíes, luego se hace el siguiente cálculo: Reticulocitos contados ---- 1000 hematíes X ----- 100 hematíes X: es el número de reticulocitos por 100 Hematíes.