EXPLORATION DE LA COAGULATION Quand explorer la coagulation

EXPLORATION DE LA COAGULATION

Quand explorer la coagulation? • Manifestations cliniques hémorragiques • Incident hémorragique per- ou post-opératoire • Bilan pré-opératoire • Thromboses • Surveillance traitement anticoagulant

Mesure du temps de Quick(tq) ou taux de Prothrombine (TP) � Temps de formation d’un caillot de fibrine d’un plasma déplaquetté, décalcifié, en présence de FT, PL et Ca 2+ • N = 11 -13 sec • Expression TQ en pourcentage Taux de Prothrombine (TP): besoin étalonnage Droite de Thivolle

• Etalonnage: • Mesure TQ sur Plasmas calibrés TP 100%, 50%, 33%, …. • Droite de Thivolle T Q se c 100 50 33 • TP Pathologique si < 70% = TQ allongé %T P • Expression TQ en INR (International Normalized Ratio) : réservé aux surveillances de patients traités aux Anti. Vitamines K ( ) TQ Patient ISI INR= TQ Témoin ISI: Indice de Sensibilité Internationale de la thromboplastine

Mesure du temps de Céphaline + activateur (TCA) � Temps de formation d’un caillot de fibrine d’un plasma déplaquetté, décalcifié, en présence d’activateur des facteurs « contacts » , de PL et de Ca 2+ • N: 30 -35 sec • Résultat exprimé en secondes par rapport à un plasma Témoin normal • TCA allongé si ratio TCA Patient TCA Témoin > 1, 2

Détection de la formation du caillot de Fibrine �Lecture « oculaires »

� Lecture « électromagnétique » sur semi- ou automates complets Bille aimantée Micro-cuvette immobile Bobine électromagnétique Oscillation pendulaire de la bille ralentissement puis arrêt mouvement pendulaire par caillot fibrine Micro-cuvette en rotation Bille aimantée « Ergot central » Aimant Immobilité de la bille par aimantation emprisonnement dans caillot de fibrine provoque mise en rotation associée à la micro-cuvette

� Sur semi- ou automates complets, • Déclenchement chrono simultané à addition réactif « déclenchant » (Thromboplastine pour TQ, Ca. Cl 2 pour TCA) par pipette reliée électriquement • Arrêt Chrono automatique par détection caillot fibrine: • arrêt mouvement pendulaire bille (diminution intensité champ magnétique) • mise en rotation bille (coupure champ magnétique) • changement de turbidité � Sur semi-automates, • Addition manuelle: plasma, réactif « déclenchant » � Sur automates complets, • Travail sur Tube primaire Sang centrifugé (Anticoagulant Citrate de Na+ 3, 8%), tous les additions de réactifs sont automatisées

Mesure du temps de thrombine (TT) � Exploration de Fonctionnalité de la Fibrinoformation � Temps de formation d’un caillot de fibrine d’un plasma déplaquetté, décalcifié, en présence d’une quantité standardisée de thrombine diluée et de Ca 2+ Thrombine calcique préchauffée à 37°C 200µl Plasma 200µl Stop Chrono Déclenchement Chronomètre Préchauffage 2 min 37°c TT Caillot Fibrine • N 22 sec • Réalisé si TQ et TCA allongés • Si TT allongé: investigations supplémentaires (PDF, D-Dimères, Fibrinogène « immunologique » )

Dosage chronométrique du Fibrinogène � dosage indirect, car mesure d’un temps d’apparition de fibrine par transformation de la totalité du fibrinogène présent � temps de coagulation à 37°C d’un plasma dilué, citraté, déplaquetté, en présence de thrombine concentrée, est inversement proportionnel à la quantité de fibrinogène � dosage quantitatif et qualitatif � besoin étalonnage Temps de coagulation en sec. Plasma 200µl 1, 5 3 6 Thrombine calcique préchauffée à 37°C 200µl Stop Chrono Déclenchement Chronomètre Préchauffage 2 min 37°c Fibrinogène g/L Caillot Fibrine Temps de coagulation

Dosage chronométrique isolé de facteur de la coagulation � Plasmas réactifs déficients en un seul facteur � Temps de coagulation d’un plasma déficitaire est fonction de la quantité du facteur apporté par le plasma à tester � Résultats exprimés en % de facteur par rapport à des plasmas normaux étalons

Dosage chronométrique facteur VIII

Dosage chronométrique facteur VII

Dosage chromogénique isolé de facteur de la coagulation � Dosage colorimétriques (ou amidolytiques) � utilisation de substrats oligopeptidiques chromogènes: groupement paranitroaniline libère amine p. NA par coupure enzymatique � dosage d’activité enzymatique: concentration enzyme (facteur) est proportionnelle à la vitesse d’hydrolyse, mesurée par la variation absorbance à 405 nm (dosage pt final, 2 pts, cinétique…)

Dosage chromogénique facteur VIII

Épreuve de correction de l’allongement isolé du TCA Calcul Indice de Rosner (TCA Mélange – TCA Témoin N) TCA Patient x 100 • Indice <12 : TCA Patient corrigé par Témoin: Déficits Facteurs • Indice >15: TCA Patient non corrigé par Témoin: Ac Anti. Coagulants Circulants