Estudios Moleculares Hemoglobinopatas Sicklemia talasemia Hemopatas malignas ESTUDIOS
Estudios Moleculares Ø Hemoglobinopatías: Sicklemia -talasemia Ø Hemopatías malignas
ESTUDIOS MOLECULARES EN ANEMIA DREPANOCÍTICA (SICKLEMIA) Diagnóstico prenatal Ø Detección de -talasemia Ø Determinación de los haplotipos asociados al gen S Ø
Diagnóstico Prenatal de la Sicklemia PRIMERA APLICACIÓN CLÍNICA DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN EL MUNDO Y EN CUBA. Ø 1978 - polimorfismo Hpa I. Ø 1982 - estudio directo de la mutación s. Ø 1983 - primer DP de la SS en el IHI. Ø 1983 - Primer lugar en el concurso “Premio Anual de la Salud”. Ø Se realizaron los primeros 100 estudios.
- talasemia en SS Ø Se determinó la frecuencia de -talasemia en pacientes SS (234 pacientes estudiados). frec (- ) SS: 0. 1880 frec (- ) no-blancos AA: 0. 1136 p 0. 001 Ø Encontramos que la -talasemia aumenta con la edad, es decir, que aumenta la sobrevida. (G. Martinez et al: Age dependence of the gene frequency of thalassemia in sickle cell anemia in Cuba. Blood 88: 1898, 1996).
Haplotipos asociados al gen s Ø Se determinó la frecuencia de los diferentes haplotipos asociados al gen s (91 pacientes estudiados). Benin: 51% Bantú: 41% Senegal: 8% Ø Se encontró que la frecuencia del haplotipo Bantú disminuye y el Senegal aumenta con la edad del paciente SS. (A. Muñiz et al: Sickle cell anemia and - gene cluster haplotypes in Cuba. Am J Hematol 1995, 49: 163).
Bases Moleculares de la -talasemia Ø Se establecieron las bases moleculares de la -talasem talase ia la población cubana. Ø Se identificaron 17 mutaciones diferentes. en Ø Las mutaciones más frecuentes fueron: Codón 39 (30. 5%) IVS 1 - 110 (8. 5%) -29 (13. 4%) IVS 2 - 1 (8. 5%) Ø La gran variabilidad de las bases moleculares hace muy difícil el diagnóstico prenatal de la talasemia mayor y de la S/ -talasemia. Ø Los resultados moleculares conjuntos en SS y -talasem talase ia constituyeron el tema de una Tesis de Doctorado.
Estudios Moleculares en Hemopatías Malignas Ø Reordenamiento de los genes de las Igs y RT en síndromes linfoproliferativos. Ø Genes híbridos originados por translocaciones y otras alteraciones en leucemias. Ø Quimerismo molecular en TMO
Resultados en esta primera etapa (1980 -90) Los estudios del reordenamiento de los genes de las Igs y del RT que demostraron: Ø Heterogeneidad molecular en la LLC. Ø Reordenamiento no productivo en LLC (mutación tipo talasemia). Ø Estos resultados, unidos al estudio inmunológico y la evaluación clínica recibieron el Primer Lugar en el “Premio anual de la Salud” (1989). Se contribuyó al diagnóstico y estadificación de los linfomas. Ø
Resultados en esta primera etapa (cont. ) Ø Se realizaron aportes en la LMC apoyando los resultados de otros autores sobre la heterogeneidad molecular de esta entidad. Ø Estos estudios en LMC dieron lugar a una Tesis de Doctorado.
Alteración Gen híbrido t(15; 17) t(12; 21) t(8; 21) t(9; 22) t(4; 11) inv 16 DIT FLT 3 PML-RAR TEL-AML 1 -ETO BCR-ABL MLL-AF 4 CBF -MYH 11
Alteración No. de casos % PML-RAR 104 (97) 93. 0 AML 1 -ETO 78 (15) 20. 0 CBF -MYH 11 80 (4) 5. 0 MLL-AF 4 52 (1) 2. 0 DIT FLT 3 108 (17) 17. 0 (DIT FLT 3 (+) en LPA: 53%)
Diagnóstico Morfológico Diagnóstico Molecular 2 pacientes M 3 ó M 4 1 M 3 t(15; 17) 4 pacientes M 2 ó M 3 1 M 3 t(15; 17) 3 M 2 t(8; 21) 1 paciente M 3 ó M 7 1 M 3 t(15; 17)
El estudio molecular comenzó en 1995. 104 pacientes estudiados 97 (93 %) pacientes RT-PCR+ 7 ( 7 %) pacientes RT-PCR – (En un paciente – se comprobó PLZF-RARA) Frecuencia de los puntos de ruptura (bcr): bcr 1: 66 % bcr 2: 5 % bcr 3: 29 %
Posible quimera M 3: M 5 en LPA: diferente respuesta clonal al tto. con ATRA y quimioterapia
Alteración TEL-AML 1 BCR-ABL MLL-AF 4 No. casos % 164 (33) 21. 0 154 (3 M; 7 m) 154 (5) 6. 5 3. 2
t(9; 22) Puntos de ruptura bcr-abl No. Casos % p 210 b 3 -a 2 61 (35) 57. 4 p 210 b 2 -a 2 61 (24) 39. 3 p 210 b 2 -a 3 1 1. 6 p 190 e 1 -a 2 1 1. 6
Quimerismo Molecular en TMO 12 TMO monitoreados: Ø 9 hemopatías malignas Ø 3 hemopatías no malignas Resultados al mes: Ø QC: 9 Ø No quimera: 2 Ø QM: 1 (que posteriormente pasó a QC).
Resumen de los resultados de nuestro Dpto. Ø Ø Ø Ø Aproximadamente 100 publicaciones. 3 Premios del Concurso del Minsap 3 Tesis de Doctorado 15 TTR de residentes de Hematología 1 TTR de un residente de Genética Médica 8 Trabajos de Diploma de la Universidad Varios cursos nacionales e internacionales.
¿Qué se está haciendo en el Mundo ahora? RT-PCR cuantitativo Ø Estudio del Transcriptoma Ø Estudio del Proteoma Ø Terapia Molecular Dirigida Ø
RT-PCR cuantitativa Ø Gran importancia en el seguimiento de la LMC. Ø La importancia en LPA está aún por determinarse. Ø En LLA, el resultado de la RT-PCR cuantitativa al final de la inducción y al finalizar la consolidación determina el riesgo: alto intermedio bajo
Progresión del Genoma al Proteoma Genoma GEN Transcripción Transcriptoma (variantes de empalme) ARNm Traducción Perfil de la expresión génica (Microarray analysis) Proteína Proteoma Modificaciones post-traduccionales + Interacción con otras proteínas Funciones Análisis del proteoma (Proteomics)
n Es el conjunto de ARNm expresados en una célula o tejido en un momento dado. n Permite identificar subclases moleculares que no se pueden detectar por técnicas convencionales. n Puede ayudar en el diagnóstico. n Permitirá conocer el mecanismo de resistencia a las drogas. n El objetivo futuro es caracterizar la célula madre para eliminar el clon neoplásico en su origen.
n Representa la población de proteínas en una célula o tejido en un momento dado. n Detecta la localización, las modificaciones posttraduccionales, interacciones y recambio de las proteínas. n Es a nivel del proteoma que el gen ejerce su función. n Ofrece una mejor comprensión del fisiológico y patológico de un organismo. estado
Transcriptoma n No detecta modificaciones post-traduccionales ni las interacciones entre las proteínas. n Existen diferencias entre la vida media de los ARNm y la vida media de las proteínas. Proteoma n Las técnicas son complejas. n No puede detectar proteínas en poca cantidad. n No puede hacer un análisis en una sola célula.
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