Espectrofotmetro Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentao Laboratorial

Espectrofotômetro Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial

Exemplo de laudo de glicemia: Glicemia 190 mg/d. L valor de referência 70 a 99 mg/d. L

Onda de luz

T = transmitância Po = quantidade de luz monocromática incidente A = Absorbância P = quantidade de luz monocromática transmitida

Lei de Lambert-Beer

Componentes do Espectrofotômetro • Fonte de luz estável • Filtro que permite a passagem de um comprimento de onda específico • Cubeta de leitura da amostra • Fotodetector • Processador • Tela de leitura das medidas

Componentes

Fonte de luz • Tungstênio: • Deutério: • Xenônio: fornece luz no espectro visível fornece luz na faixa de UV. forncece luz no espectro visível e UV.

Filtros Pré-amostra O filtro está posicionado entre a fonte de luz a e amostra. Pós-amostra O filtro ou prisma está posicionado entre a amostra e o fotodetector.

Prisma

Cubetas de leitura Devem ser de material transparente para os comprimentos de onda utilizados. Para o espectro UV (que lê comprimentos de onda < 350 nm) as cubetas devem ser feitas de sílica ou quartzo. Para os comprimentos de ondas visíveis pode ser de material plástico ou vidro. Normalmente tem 1 cm de largura (path length). Devem ser muito bem limpas e secas após o uso.

Cubetas para leitura Cubetas

Fotodetector • Fotomultiplicador Fótons da onda eletromagnética do comprimento de onda estudado excitam os elétrons da última camada dos metais presentes no fotomultiplicador, criando uma corrente elétrica que pode ser amplificada e quantificada.

Fotomultiplicador

Espetrofotômetro

Espectrofotômetro

Espectrofotômetro cobas modular (Roche)

Gene. Quant para amostras de DNA e RNA

Espectrofotômetro Nanodrop para amostras de DNA e RNA

Gráfico de uma análise espectrofotométrica de DNA

Quantificação de DNA ou RNA Por definição, uma unidade de absorbância a 260 nm equivale a uma concentração de 50 ug/m. L. Para RNA uma unidade de absorbância em 260 nm equivale a uma concentração de 40 ug/m. L