Enzyme Enzyme kinetics LOGO Catalytic power proteins E

Enzyme & Enzyme kinetics LOGO § Catalytic power § 대부분 proteins § E + S → ES complex → E + P § Activation energy (Ea or ΔG‡)를 낮춤으로써 반응속도를 증가시킴. § Activity는 온도, chemical environment (p. H), substrate의 농도에 의해 영향을 받음. § Very specific (substrate specificity) lock & key model, induced fit model § Holoenzyme : apoenzyme (protein) + cofactor (coenzyme) Development & Cell Differentiation Lab.

Enzyme & Enzyme kinetics § 효소 촉매에 의해 일어나는 화학반응을 연구하는 학문 § 효소반응 속도에 영향을 미치는 요인 Enzyme의 농도, substrate의 농도, inhibitor의 농도 § 반응속도(v) A → P V = -ΔA/ ΔT = ΔP/ ΔT V = k[A] (k = rate constant) A+B → P V = k[A][B] § Enzymes의 kinetic property Development & Cell Differentiation Lab. LOGO

Lineweaver-Burk plot (Double-reciprocal plot) Vmax [S] V 0 = 1 V 0 Km + [S] = y = Km Vmax ax · 1 [S] + + 1 Vmax b Development & Cell Differentiation Lab. LOGO

LOGO Experimental method Alkaline phosphatase라는 enzyme을 이용하여 효소반응속도를 학습한다. (무색) (밝은 노랑) Alkaline phosphatase(ALP) ρ-Nitrophenylphosphate(PNPP) : no color ρ-Nitrophenol(PNP) : bright yellow , 410 nm에서 최대흡광 즉, PNPP에 ALP를 처리하면 PNP(노랑)가 형성 ALP의 처리시간을 달리하여 흡광도를 측정하면 PNPP(반응물)에서 PNP(생성물)로의 ALP의 효소반응속 도 를 측정할 수 있음. Development & Cell Differentiation Lab.

Procedure 준비물 Spectrophotometer Enzyme : calf intestine alkaline phosphatase Substrate : ρ-nitrophenylphosphate (10 m. M) Unknown inhibitor A (1 m. M) Reaction buffer : 100 m. M Tris-HCl, 2 m. M spermidine, 0. 2 m. M Zn. Cl 2, 2 m. M Mg. Cl 2 Stop buffer : 100 m. M Na. OH Stopwatch D. W (distrilled water) Development & Cell Differentiation Lab. LOGO

LOGO Result 1. 3. 1번과 2번 결과에 대한 Lineweaver-Burk plot 4. 각각의 Vmax와 Km 값. 2 3 5. inhibitor A의 inhibitor mode 2. 2 3 Development & Cell Differentiation Lab.