ELISA Enzime Linked Inmunosorbent Assay Inmunologa Clnica Lab

ELISA (Enzime Linked Inmunosorbent Assay)

Inmunología Clínica – Lab. ELISA Técnica inmunoenzimática Basada en el marcaje de un antígeno o un anticuerpo con una enzima para su posterior detección. Ventajas de las técnicas inmunoenzimáticas Las enzimas poseen un bajo costo, se pueden purificar a partir de fuentes naturales comunes, tienen una aceptable estabilidad o vida útil, y no requieren de equipo muy especializado para la cuantificación de su actividad

Inmunología Clínica – Lab. El ELISA es empleado para Detección de Antígenos ü ELISA sandwich ü ELISA competitivo Detección de Anticuerpos ü ELISA indirecto

Inmunología Clínica – Lab. ELISA SANDWICH Se basa en unir a la fase sólida una capa de anticuerpos, que capturan el antígeno presente en el suero. Después de lavar el material no unido, el antígeno capturado se detecta mediante el uso de anticuerpos contra él, los cuales están conjugados directamente con la enzima indicadora.

Inmunología Clínica – Lab. ELISA COMPETITIVO En esta técnica se incuba el anticuerpo en solución con una muestra que contiene antígeno. La mezcla de Ag-Ac se añade a un foso recubierto con Ag. Cuanto más antígeno haya en la muestra, menos Ac habrá libre para unirse al Ag que recubre al foso. Se agrega un Ac. Secundario conjugado con la enzima para determinar la cantidad de Ac unido al foso.

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Inmunología Clínica – Lab. ELISA INDIRECTO Se añade suero que se presume que contiene el anticuerpo a un foso recubierto con Ag. Se permite que el Ac reaccione con el Ag y se elimina por lavado cualquier anticuerpo no unido. El Ac unido al Ag se detecta por la adición de un segundo anticuerpo antiespecie secundario conjugado con enzima, que se une al anticuerpo primario. Se añade un sustrato para la enzima, y la canidad de productode la reacción de color se mide con lectores espectrofotométricos de placa.

Inmunología Clínica – Lab. Enzimas y sustratos empleados en inmunoensayos Peroxidasa (obtenida del rábano picante) y Fosfatasa alcalina (obtenida de mucosa intestinal bovina). Acopladas covalentemente a los anticuerpos sin perder su actividad catalítica, ni alterar la capacidad de unión de los mismos. Son estables durante largos períodos y catalizan reacciones simples que pueden generan productos coloreados, tanto solubles como precipitables.

Inmunología Clínica – Lab. ELISA CUANTITATIVA Para las técnicas de cuantificación de antígeno, se utilizan patrones de concentración conocida del mismo, que se corren simultáneamente con las muestras, con el fin de trazar una curva de referencia. La absorbancia (color) obtenida guarda una proporción con la cantidad de antígeno presente en los estándares y las muestras. De esta forma, las lecturas de absorbancia son convertidas en unidades de masa (ej. pg/ml, ng/ml, etc. ).

Inmunología Clínica – Lab. Curva para cuantificación de Antígeno

Inmunología Clínica – Lab. Curva para cuantificación de Antígeno

Inmunología Clínica – Lab. ELISA CUANTITATIVA En el caso de cuantificación de anticuerpos es usual trabajar con unidades relativas o arbitrarias, sin una conversión a unidades de masa. Por ejemplo, se puede estimar la cantidad de anticuerpos mediante curvas de titulación, corriendo diluciones seriadas de cada muestra. El título puede definirse arbitrariamente de varias maneras.

Inmunología Clínica – Lab. Curva para cuantificación de Anticuerpo

Inmunología Clínica – Lab. KITS COMERCIALES

Inmunología Clínica – Lab. Lector de ELISA

Inmunología Clínica – Lab. Aplicaciones DIAGNOSTICO DE INFECCIONES POR MICROORGANISMOS DETECCION Y CUANTIFICACION DE ANTICUERPOS CUANTIFICACION DE METABOLITOS, HORMONAS, DROGAS, MEDICAMENTOS MONITOREO DE HORMONAS – TRATAMIENTO.