ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Esercitatori 94C 30
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ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO Esercitatori
94°C 30’’’ 30’’ 58°C 72°C 5’ CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR 2° DAY 30’’ Thermal Cycler 1’ 4°C 28 Cycles (2 n-2 n)x n= cycles number x= starting template DNA The integrity of PCR amplicons will be analyzed by electroforesis
ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO 2° DAY • Permette la separazione di acidi nucleici in funzione delle loro dimensioni, della carica e della forma • E’ una tecnica fondamentale per: 1_l’analisi (elettroforesi analitica); 2_la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa)
ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO catodo anodo - + RNA e DNA sono carichi negativamente 2° DAY Gli acidi nucleici sono carichi negativamente ed in un campo elettrico migrano dal polo negativo verso il polo positivo.
Effetto “setaccio” in un gel uniforme Nell’elettroforesi gli acidi nucleici vengono sottoposti ad un campo elettrico (vengono “fatti migrare” o “correre”) all’interno di una matrice (gel di agarosio o poliacrilammide). ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO - 2° DAY +
L’agarosio è un polisaccaride, isolato da un’alga, costituito da residui alternati di D-galattosio e 3, 6 -anidro-L-galattosio. ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO L’elettroforesi in gel di agarosio consente la separazione di molecole di grandi dimensioni (100 -20. 000 paia basi). 2° DAY Concentrazione di agarosio 0. 8% : 2% : Risoluzione 0. 5 – 20 kb 0. 1 – 3 kb
• • 1% agarose gel in 1 X TAE electroforesis buffer Run Time: 40 min. Voltage: 80 V Samples: 1/20 final Volume (5 l) + Loading buffer PROTOCOLLO GEL AGAROSIO 100 V Polo - 2° DAY Polo + 0, 2 A
ON 100 V 0, 2 A Polo - CORSA SU GEL AGAROSIO Polo + White 2° DAY UV
CORSA SU GEL DI AGAROSIO DEI PLASMIDI 3° DAY
NANODROP: Dosaggio Spetrofotometrico del DNA Plasmidico 3° DAY
