EKSTRAKSI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM LIPASE EKSTRAKSI ENZIM

EKSTRAKSI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM LIPASE

EKSTRAKSI ENZIM LIPASE �Lipase (triacyl glycerol acylhydrolase, EC. 3. 1. 1. 3) enzim yang menghidrolisis triasilgliserol menjadi asam lemak bebas dan gliserol dan mempunyai aktivitas maksimum pada daerah interface minyak dan air �Produk hasil hidrolisis yang lain adalah monogliserida dan digliserida. �Penggunaan enzim lipase antara lain pankreas, susu, tanaman yang menghasilkan trigliserida (seperti kacang, kedelai), kapang dan bakteri.

Reaksi Trigliserida

Faktor hidrolisis lipase �Suhu �p. H �Konsentrasi substrat �Konsentrasi Enzim

Satuan Aktivitas Enzim �Satuan unit ( U ) yang didfinisikan sebagai jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per menit pada kondisi tertentu. Satuan 1 Unit Enzim (UE) : mol per menit �Sistem SI; dengan satuan KATAL yang didefinisikan sebagai : jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per detik ( 1 KAT = 60 x 106 Unit) atau 1 Unit = 16. 67 nanokatal. Sistem ini belum banyak diterima secara luas

Tujuan Praktikum �Mempraktikkan cara menguji aktivitas lipase dari kacang tanah dan dedak padi �Menghitung aktivitas enzim

Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Dedak Padi �Bahan ◦ ◦ ◦ dedak padi susu sapi segar dietil eter buffer phospat p. H 7. 5 Na. OH 0. 1 N indikator PP ◦ alkohol

Alat �corong 10 ml �kertas saring �magnetik stirer ukur 50 ml �sentrifuse �mortar �Water bath �erlenmeyer 100 ml �neraca analitik pipet volume bola hisap gelas beker buret pengaduk pipet tetes

� Dedak padi sebanyak 10 gram � ditambah 50 ml dietileter, aduk-aduk dan gojog untuk melarutkan lemak. � Saring dengan kertas saring, filtratnya berisi lemak dan turunannya yang larut dalam dietil eter. � Ampas yang diperoleh ditambah dengan 40 ml 50 m. M bufer phosphat p. H 7 atau 40 ml 10 m. M Tris HCL Bufer p. H 7, 5 � Campuran tersebut dimagnetik stirer selama 30 menit. � Selanjutnya saring dengan kain saring dua lapis. � Filtratnya disentrifugasi, supernatan merupakan

Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Kacang Tanah �Bahan: �susu sapi segar �kacang tanah �alkohol �buffer phospat p. H 6. 5 �Indikator Na. OH 0, 1 N �Indikator pp

Hancurkan 5 gram kacang tanah � Tambahkan 50 ml 0, 1 N Na. Cl atau 0, 1 M buffer phospat p. H 6, 5 biarkan 30 menit pada suhu kamar. � Saring dengan kertas saring kasar. Filtrat yang diperoleh merupakan ekstrak enzim lipase kasar. � Substrat (susu sapi segar) dipanaskan suhu 80 o. C selama 10 menit. � Sebanyak 8 ml substrat (susu sapi pasteurisasi) dimasukkan dalam labu Erlenmeyer 100 ml dan seimbangkan suhunya dalam penangas air 370 C. � Tambahkan 2 ml ekstrak enzim lipase kasar. � Inkubasikan selama 10 menit, 370 C. Setelah inkubasi tambahkan 40 ml alkohol. � Sebagai blanko adalah susu sebanyak 8 ml ditambah 2 ml larutan pengekstrak enzim (Larutan Na. Cl atau Buffer phosphat) dan 40 ml alkohol tanpa dilakukan inkubasi. � Tambahkan 5 tetes indikator pp pada msing-masing sampel dan blanko, kemudian titrasi dengan 0, 1 N Na. OH sehingga berubah menjadi mencapai warna PINK. �

enzim dinyatakan dalam mol / menit ml enzim atau Unit/ml �Aktivitas lipase = ( ts- tb ) Na. OH x M Na. OH x 1000 � Volume enzim x menit �Satuan aktivitas lipase = μmol/ ml enz mnt � Dengan : ts = titrasi sample � tb = titrasi blanko � waktu inkubasi = 10 menit � M Na. OH = Molaritas Na. OH � 1000 berasal dari konversi mmol = 1000 μmol �Aktivitas

% kemurnian = 100% x aktivitas spesifik sampel enzim aktivitas spesifik enzim murni