Dosage de lhmoglobine Principe n Dosage en images

Dosage de l’hémoglobine Principe n Dosage en images n Résultats n Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

L’hémoglobine Hème n Molécule hétéroprotéique n n Histidine proximale tétramérique : 4 chaînes de globine associées chacune à une molécule d’hème par liaison du fer à des résidus d’histidines contenue à saturation dans l’hématie normale responsable du transport des gaz (en particulier le dioxygène) par fixation entre le fer (Fe 2+) de l’hème et la chaîne protéique Fer Di oxygène Histidine distale Monomère d’hémoglobine Molécule oxydable en méthémoglobine (Fe 3+) instable et non fonctionnelle Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Principe du dosage de l’hémoglobine n Ajout de réactif de Drabkin au sang Hémolyse les globules rouges libérant l’hémoglobine Oxydation de l’hémoglobine en méthémoglobine (Fe 3+) par les ions ferricyanures Hb (Fe 2+) [Fe(CN)6]3[Fe(CN)6]4 - Hexacyanoferrate III de potassium K 3[Fe(CN)6] Formation d’un complexe : la cyanméthémoglobine grâce aux ions cyanures Met. Hb (Fe 3+) CN- Cyanure de potassium KCN Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET CN-, Met. Hb (Fe 3+)

Principe du dosage de l’hémoglobine n Mesure de l’absorbance (A) de la solution diluée obtenue parallèlement à un étalon de concentration massique connue n n Année 2008 à 540 nm (pic d’absorption maximale de la cyanméthémoglobine) avec proportionnalité entre l’absorbance et la concentration massique pour des solutions très diluées (Loi de Beer Lambert) Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Dosage en images Organisation du poste Préparation du matériel nécessaire et en particulier remplissage des tubes par 5 m. L de réactif de Drabkin Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Dosage en images Prélèvement du sang Homogénéisation Aspiration de 20 µL Essuyage du cône Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Dosage en images Dilution dans le liquide de Drabkin Dépôt des 20 µL dans les 5 m. L de réactif de Drabkin Rinçage du cône par aspiration refoulement du réactif de Drabkin surnageant Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Dosage en images Homogénéisation de la solution Homogénéisation par retournement après bouchage du tube par du parafilm Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Dosage en images Mise en cuve et lecture au spectrophotomètre Remplissage d’une cuve de spectrophotomètre Lecture à 540 nm du témoin réactif, de l’étalon et de l’essai Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Dosage en images Gestion des déchets Élimination des solutions contenant du réactif de Drabkin dans un conteneur dont le contenu sera traité par de l’eau de Javel Élimination immédiate des déchets : cônes, papiers souillés … gants Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Résultats n Expression de la concentration massique d’hémoglobine contenue dans un litre de sang pur essai en g d’Hb/L de sang = Aessai x étalon Année 2008 Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET

Interprétation Valeurs seuils Valeurs de référence 110 g d’Hb /L sang 120 à 160 g d’Hb /L sang 130 g d’Hb /L sang 140 à 180 g d’Hb /L sang n è Année 2008 Résultat inférieur aux valeurs seuils Anémie n è Résultat supérieur aux valeurs de référence Polyglobulie probable (à confirmer par un hématocrite et une numération érythrocytaire élevés) Equipe pédagogique du Lycée Jean MOULIN (ANGERS) DURAND - POCHET