DNR pirt antspaud procedra DNAFingerprint 1 Mgintuvliai kiekvienai

DNR pirštų antspaudų procedūra DNA-Fingerprint 1

Mėgintuvėliai kiekvienai grupei DNA-Fingerprint 2

10 µl CS DNR Tiriamieji 1 – 5 Mėgintuvėliai su 10 µl DNR pavyzdžiu 70 µl Fermentų 0, 24 g Agarozės mišinio 80 µl Buferinio užpildo DNA-Fingerprint 10 µl žymeklio 3

1. Pasiruošimas restrikcijai DNA-Fingerprint 4

Dėmesio! • Kiekvienam medžiagų įpilimui naudoti švarią pipetę, kad išvengtumėte nereikalingo medžiagų susimaišymo. • Lengvai sprigtuokite kiekvieną mėgintuvėlį mažiausiai 30 sekundžių, kad gerai susimaišytų juose esančios medžiagos. DNA-Fingerprint 5

1. Mėgintuvėliai su DNR mėginiais CS DNR S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 10µl 10µl DNA-Fingerprint 6

1. 1 Įdėkite po 10 µl fermentų mišinio į kiekvieną mėgintuvėlį CS DNA S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 10µl 10µl Fermentų- 10µl 10µl mišinys (ENZ) DNA-Fingerprint 7

2. Restrikcijos fermentavimasis Patalpinkite mėgintuvėlius į 37 °C vandens vonelę ir laikykite joje 20 minučių. DNA-Fingerprint 8

3. Pasiruošimas elektroforezei DNA-Fingerprint 9

3. 1 Gelio elektroforezės paruošimas Metaliniai strypeliai Šukos Padėkliukas Įdėkite padėkliuką, metalinius strypelis ir šukas į elekroforezės kamerą DNA-Fingerprint 10

3. 2 Agarozės gelio (0, 8%) paruošimas • Įdedame 0, 24 g agarozės + 30 ml TAEbuferio į 250 ml Erlenmėjerio kolbą. • Pakaitinti Erlenmejerio kolbą mikrobangų korsnelėje, pamaišome ją ir vėl pakaitiname. DNA-Fingerprint 11

3. 3 Gelio įpilimas Įpilame 55 °C gelio į gelio dėžutę. Dėmesio: • Išmatuojame temperatūrą su ranka. • Nejudinkite gelio iki tol, kol jis netaps vientisas. DNA-Fingerprint 12

3. 4 Kameros paruošimas • Kai gelis pasidaro vientisas, išimkite metalinius strypelius iš kameros • Užpildykite kamerą 270 ml of TAE-buferio, kad apsemtų gelį. • Išimkite šukas. DNA-Fingerprint 13

4. DNR žymeklio paruošimas Įdėkite 10 µl buferio užpildo (LB) į 10 µl DNR žymeklį (M). DNA-Fingerprint 14

5. 10 µl buferio užpildymas 10 µl Įdėkite 10 µl buferio į CS ir S 1 – S 5. DNA-Fingerprint 15

6. Šulinėlių turinys Kairysis perėjimas turi likti tuščias. Įdėkite 20 µl kiekvieno pavyzdžio ir 20 µl DNR žymeklio (M) į šulinėlius. Atsiminkite seką! Užpildykite iš kaires į dešinę DNA-Fingerprint 16

6. Šulinėlių užpildymas Dėmesio: Gelio maišeliai negali būti praduriami. DNA-Fingerprint 17

7. Gelio elektroforezė (naudojant 120 V) (30 min) Sustabdykite elektroforezę, kuomet mėlyna juosta pasislinks 1 cm iki gelio apačios. DNA-Fingerprint 18

8. DNR ryškinimas • Perkelkite gelį į ryškinimo dubenį ir užpilkite jį 60 ml dažomojo tirpalo. • Nupilkite atgal dažomąjį tirpalą, į kolbą DNA-Fingerprint 19

CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 M 9. Išanalizuokite gelį Kuris tiriamasis yra nusikaltėlis? DNA-Fingerprint 20

9. Rezultatai DNA-Fingerprint 21