DNA purification Clear lysate DNA Pronase Proteinase Phenol

DNA purification(정제) Clear lysate로부터 DNA 정제. Pronase 처리. Proteinase 처리. Phenol extraction(Phenol : Chloroform = 1 : 1). Rnase 처리. RNA, Protein 제거 작업.

DNA purification(정제)

DNA Concentration Na+(1가 이온)의 염류 존재 하에 -20℃ Absolute ethanol(100% ethyl alcohol)을 2 Vol. 첨가한 후, 16 - 18시간 정치. 원심분리 한 후 상층 액 제거하고, Air dry 시킨다 (DNA 침전 : DNA ppt. ). TE(Tris-EDTA) buffer로 DNA를 용해시킴. Ethanol Precipitation(Et. OH ppt. ).

DNA Concentration

plasmid DNA 분리

plasmid DNA 분리 1. 형태에 따른 분리 방법. 1)Alkali 변성 법. 2)Et. Br-Cs. Cl 밀도 기울기 원심분리 법. 2. Plasmid DNA 의 4가지 형태 Super coil form. CCC- form. OC- form. L- form.

Et. Br-Cs. Cl 밀도기울기 원심분리 법 Ethidium bromide –Caesium chloride Density gradient centrifugation.

Et. Br(Ethydium bromide)의 구조와 기능 부력 밀도 감소 시킴 : 0. 125 g/㎤(L-form). CCC – form : 0. 085 g/cm 3.

Cs. Cl(Caesium Chloride)의 기능

plasmid DNA 분리 및 정제

plasmid Amplification(증폭) 세균의 수가 최대치에 도달한 후, Chloramphenicol을 첨가. 12시간 배양 : plasmid DNA 만 복제됨 (plasmid DNA Amplification).

Bacteriophage 의 수집 PEG(Polyethylene Glycol) 이용. 1010 개/㎖ : 500 ng/㎖ 수확. Phage titre(역 가) : 파지 수/㎖.

⋋ phage DNA의 정제 PEG 침전. TE buffer로 phage 용해. Phage 용균(Phenol 처리). Cs. Cl 밀도 기울기 원심분리. 1. 45~1. 5 g/㎤ band 형성. Dialysis(투석) : Cs. Cl 제거.

⋋ phage DNA의 정제