DNA Extraction DNA isolation DNA Genomic DNA plasmid

서론 (DNA Extraction) • DNA isolation - 세포에 있는 DNA를 연구 등의 목적으로 분리하여 내는 것 - Genomic DNA, plasmid DNA • Plasmid DNA isolation = Mini/Midi/Maxi prep - 박테리아(대장균)의 cell wall과 cell membrane을 깨뜨려 크기가 큰 chromosomal DNA를 제외한 작은 크기의 plasmid DNA를 분리하는 것.

서론 (DNA Extraction) • Mini Prep p. H에 따라 double helix 형태와 supercoiled 형태가 변성되는 것이 다른 원리를 이용하여 순수한 plasmid DNA를 정제할 수 있다. Double helix DNA가 denature(변성)되어 single strand DNA로 Supercoiled DNA인 plamid는 상태 유지

서론 (Restriction enzyme) Plasmid vector map (p. SG 5)

서론 (Restriction enzyme) - Mode of action

서론 (Restriction enzyme) 제한효소의 응용

재료 및 방법 (Materials & Methods) 실험 재료(Material) - Plasmid DNA isolation Mini prep Kit - bacterial pellet(세포침전물) - 원심분리기 - 파이펫, 팁, - EP tube - 장갑 - 제한효소 (Eco. RI, DW, buffer)

재료 및 방법 (Materials & Methods) 7. collection tube에 나온 하층액을 버린 후 column을 collection tube에 꽂는다. 8. Wash Buffer(WB) (column wash solution)를 600 ul 넣고 1분간 원심분리 후 하층액을 버리고 다시 collection tube를 꽂는다. Guanidinium Chloride (guanidine hydrochloride): 남아있는 protein denature 10. 남아있는 wash buffer를 제거하기 위해 빈 column 을 2분간 원심분리 후 column을 새로운 EP tube에 옮긴다. ★☆ 뒤에 elution과정에서 column에 붙어있는 plasmid DNA들이 밑으로 내려오게 되므 로 꼭!!! 새 tube로 옮겨줄 것!!!

재료 및 방법 (Materials & Methods) 제한효소 반응 11. 10에서 얻은 DNA 10 ul 제한효소 (Eco. RI) 10 X EZ-One™ buffer 1 ul 4 ul D. W 5 ul ---------Total volume 20 ul 를 새로운 EP tube에 넣고 5회 inverting. 12. 11번의 sample을 37도에서 2시간 반응시킨다. 13. 냉동고 (-20℃)에 보관한다.