DESENVOLVIMENTO E CARACTERIZAO DOS LOCOS DE MICROSSATLITES DE

DESENVOLVIMENTO E CARACTERIZAÇÃO DOS LOCOS DE MICROSSATÉLITES DE Aeschynomene falcata (POIR. ) DC. (LEGUMINOSAE – PAPILIONOIDEAE) Polido, CA 1, 3; Mantello 2, CC; Moraes 1, AP & Forni-Martins, ER 1 1 Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Vegetal. 2 Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Centro de Biologia Molecular (CBMEG). 3 carol. bioveg@gmail. com. Resultados Introdução Tabela Aeschynomene falcata (Poir. )DC. 1: Caracterização dos 11 locos de SSR de Aeschynomenen falacata é uma leguminosa forrageira bastante utilizada para alimentação bovina, porém, as sementes não estão disponíveis em quantidades suficientes para comercialização, sendo necessárias técnicas de melhoramento genético a fim de aumentar a sua produtividade. Primer RT Queiroz Os marcadores moleculares do tipo microssatélites (Simple Sequence Repeats – SSRs), devido a sua codominância e alto nível de polimorfismo, tornaram-se uma importante ferramenta para programas de melhoramento e para estudos que envolvam diversidade genética e taxonomia. O presente estudo objetivou desenvolver e caracterizar os locos de SSRs de A. falcata bem como testar a transferibilidade dos mesmos em espécies próximas, a fim de auxiliar na averiguação das relações filogenéticas da tribo Dalbergieae. Metodologia Ø Construção de biblioteca genômica enriquecida com microssatélites [(AC)8 e (AG)n]. Ø Extração de DNA plasmidial. Ø Seqüenciamento dos clones Ø Edição das seqüências [Seq. Man (DNAStar Inc. )]. Ø Primers complementares às seqüências flanqueadoras dos microssatélites foram desenhados pelo programa Primer Select (DNAStar Inc. ). Ø Caracterização dos SSRs em 15 acessos de A. falcata. Ø Para o teste de transferibilidade foram utilizados 14 indivíduos de espécies próximas (A. brevipes, A. paniculata, Dalbergia nigra e Machaerium vestitum). Ø Análise de dados: TFPGA e PICcalculator. Aesfal 1 Aesfal 3 Repeat motif (TGG)5 (AAAAC)3 Aesfal 5 Aesfal 7 Ta (o. C) TD 55 -45 Size range (pb) 172 205 -211 Na Ho He 01 02 __ __ __ 0. 2000 0. 5080 0. 3705 (GT)15 (AC)9 TD 65 -55 TD 55 -45 196 -206 300 07 01 0. 3846 0. 8031 0. 7406 __ __ __ Aesfal 8 Aesfal 10 Aesfal 11 (GAA)4 (GAA)6 (GT)8 TD 60 -50 TD 65 -55 TD 60 -50 249 -261 154 -157 198 -220 05 02 07 0. 2667 0. 7448 0. 6739 0. 0000 0. 1287 0. 1167 0. 3333 0. 7862 0. 7245 Aesfal 13 Aesfal 14 Aesfal 16 (GT)5 (AC)10 (CA)5 TD 60 -50 TD 65 -55 305 254 -266 150 -193 01 05 06 __ __ __ 0. 0000 0. 6805 0. 6005 0. 7143 0. 8360 0. 7786 Aesfal 20 (CT)5 TD 55 -45 240 01 __ PIC __ __ Ta = temperatura de Anelamento; TD = touchdown; Na = número de Alelos; Ho = heterigozidade observada; He = heterigozidade esperada; PIC = informação de conteúdo de polimorfismo. Tabela 2: Transferibilidade em espécies Aeschynomene, Dalbergia e Machaerium de Primer A. brevipes A. paniculata D. nigra M. vestitum Aesfal 1 + + Aesfal 3 - - Aesfal 5 + + - - Aesfal 7 + + Aesfal 8 + + Aesfal 10 Aesfal 11 + - + - Aesfal 13 Aesfal 14 + + + - + + Aesfal 16 Aesfal 20 + + + + - Ø 11 SSRs amplificaram monomórficos; sendo 7 polimórficos e 4 Ø 38 alelos no total; Ø O número de alelos variou de 2 a 7; Ø 9 SSRs amplificaram em A. brevipes e A. paniculata e 7 SSRs amplificaram em D. nigra e M. vestitum; Ø Estes resultados viabilizam futuras análises de relações evolutivas entre as espécies, a partir do mapeamento físico destas sequências amplificadas. CA Polido Amplificação SSRs (agarose 3%) Genotipagem (poliacrilamida 6%)