Definitv prenatl hromosomu aberciju diagnostika metou izvle secba
Definitīvā prenatālā hromosomu aberāciju diagnostika: metožu izvēle, secība, sagaidāmie rezultāti Dr. Aigars Dzalbs Medicīniskās ģenētikas klīnika un Laboratorija, Bērnu klīniskā universitātes slimnīca Latvijas Ginekologu un dzemdību speciālistu asociācijas sēde 17. 05. 2013.
Hromosomu aberāciju biežums populācijā 20 % no visām grūtniecībām 60% agrīnu spontānu abortu gadījumos 5% vēlu spontānu abortu un nedzīvi dzimušu bērnu gadījumos 0. 6% starp dzīvi dzimušiem bērniem No: Hook (1992) un Jacobs un līdzaut. (1992). Pārpublicēts no Gardner RJM & Sutherland GR (2004) Chromosome abnormalities and genetic counseling. Oxford University Press, New York.
q Horija bārkstiņu biopsija: ü 11. – 12. grūtniecības nedēļa; ü Viltus pozitīvi rezultāti; ü Ar procedūru saistītais grūtniecības pārtraukšanās risks – ~1%. q Amniocentēze: ü 16. – 18. (23. ) grūtniecības nedēļa; ü Vēls rezultāts standarta analīzes gadījumā(> 10 dienas); ü Ar procedūru saistītais grūtniecības pārtraukšanās risks – ~0. 5%. q Augļa asinis (hordocentēze): ü > 20. grūtniecības nedēļas; ü Ar procedūru saistītais grūtniecības pārtraukšanās risks – ~5%.
Mozaīcismas prenatālajos izmeklējumos (pēc Bianchi DW et al. (1993) un Gardner RJM & Sutherland GR (2004))
Mozaīcisma veidošanās (pēc Robinson WP et al. (2002) Prenat Diagn. 22: 1076 -85. )
Laboratorās definitīvās prenatālās diagnostikas metodes • Standarta citoģenētikas (kariotipa) analīze • Fluorescentā in situ hibridizācijas metode (FISH) • Kvantitatīvā fluorescentā in situ hibridizācijas metode (QF-PCR) • Salīdzinošā genoma hibridizācijas metode
Klīniskās indikācijas standarta prenatāliem citoģenētiskiem izmeklējumiem jeb kariotipa analīzei (amnija šķidrums, horija bārkstiņas, augļa asinis) (Hastings R. , Howell R. , Bricarelli F. D. , Kristoffersson U. , Cavani S. (2012) General Guidelines and Quality Assurance for Cytogenetics. European Cytogeneticists Association Newsletter Nr. 29: 7 -25. ) v Iepriekš dzīvi dzimis bērns ar hromosomu patoloģiju v Iepriekš nedzīvi dzimis bērns ar hromosomu patoloģiju, kas potenciāli savienojama ar dzīvību v Kādam no vecākiem ir hromosomu strukturāla hromosomu aberācija, mozaīcisms vai dzimumhromosomu aneiploīdija v Pozitīvs bioķīmiskais skrīnings, kas norāda uz palielinātnātu hromosomu patoloģiju risku auglim v Palielināts mātes vecums v Izmaiņas augļa ultrasonogrāfijā v Iepriekšējos (citos) izmeklējumos auglim konstatēts mozaīcisms v Aizdomas par kādu no hromosomu trausluma sindromiem
Klīniskās indikācijas ātrajiem prenatāliem citoģenētiskiem izmeklējumiem – FISH/QF-PCR/MLPA (amnija šķidrums, horija bārkstiņas, augļa asinis) (Hastings R. , Howell R. , Bricarelli F. D. , Kristoffersson U. , Cavani S. (2012) General Guidelines and Quality Assurance for Cytogenetics. European Cytogeneticists Association Newsletter Nr. 29: 7 -25. ) v Liels hromosomu patoloģijas risks auglim, t. sk. izmaiņas augļa ultrasonogrāfijā v Liels grūtniecības laiks Klīniskās indikācijas array. CGH (daudzrindu jeb uz čipiem balstītā salīdzinošā genoma hibridizācija) izmeklējumam prenatālajā diagnostikā (amnija šķidrums) (Hastings R. , Howell R. , Bricarelli F. D. , Kristoffersson U. , Cavani S. (2012) General Guidelines and Quality Assurance for Cytogenetics. European Cytogeneticists Association Newsletter Nr. 29: 7 -25. ) v Ultrasonogrāfijā konstatētas divas vairāk augļa anomālijas (t. sk. intrauterīna augšanas aizture) v Kāds no vecākiem ir līdzsvarotas hromosomu aberācijas nesējs v Iepriekš dzimis bērns ar hromosomu patoloģiju v Hromosomu aberācijas, kas iepriekš noteikta ar citu metodi, precizēšana
Bērnu klīniskās universitātes slimnīcas Medicīniskās ģenētikas klīnikas pieredze 1996 - 2010 ü No 1996. līdz 2010. gadam veikti 5424 amnija šķidruma šūnu kultūru standarta citoģenētikas izmeklējumi (kariotipa analīzes) un 3463 fluorescentās in situ hibridizācijas (FISH) izmeklējumi biežāk sastopamo aneiploīdiju diagnostikai, rezultāts iegūts attiecīgi 5334 (98. 3%) un 3461 (99. 9%) gadījumā. ü Hromosomu aberācijas konstatētas 3. 75% (330 no 8795) prenatālās diagnostikas izmeklējumos (4. 6% standarta citoģenētikas izmeklējumos un 2. 5% FISH izmeklējumos). ü Līdzsvarotas hromosomu aberācijas amnija šķidruma šūnu kultūru citoģenētiskajos izmeklējumos atrastas 0. 4% gadījumu (7. 4% no konstatētajām aberācijām). Teilāne I, Dzalbs A, Kalnbērza G, Lugovska R. (2011) Hromosomu slimību prenatālā diagnostika Latvijā 1996 - 2010. Apvienotais Pasaules latviešu 3. zinātnieku kongress un 4. Letonikas kongress “Zinātne, sabiedrība un nacionālā identitāte”, 24. -27. oktobris, 2011; Rīga, Latvija. Medicīnas sekcijas “Medicīnas zinātne un Latvijas sabiedrības veselība XXI gadsimtā” Tēzes. 100. lpp. [80]
Prenatālajos standarta citoģenētikas izmeklējumos konstatētās hromosomu aberācijas (N = 243) 1996 – 2010
Prenatālajos molekulārās citoģenētikas izmeklējumos konstatētās hromosomu aberācijas (N = 87) 2005 – 2010
Klīniskais gadījums • 40 gadus veca grūtniece nosūtīta uz Prenatālās diagnostikas nodaļu sakarā ar palielinātu hromosomu patoloģijas risku auglim. • Gr. IV P II. I grūtniecība – meita, kurai ir valodas attīstības aizture. II un III grūtniecība – spontāni aborti. • Tiek veikta amniocentēze 16. gestācijas nedēļā un konstatēts izmainīts sievietes dzimuma augļa kariotips – 18. hromosomas īsā pleca monosomija (18 p-): 46, XX, +14, der(14; 18)(p 10; q 10). • Standarta citoģenētikas izmeklējumi tika apstiprināti ar FISH metodi. Dzalbs A, Stamere A, Taurina G, Kalnberza G, Teilane I, Grinfelde I, Bars J, Lugovska R. (2012) A familiy with whole arm translocation t(14; 18)(q 10; q 10) revealed due to prenatal diagnosis. 5 th Baltic Congress of Genetics, October 19 -22, 2012; Kaunas, Lithuania. Abstracts. Biologija. 58 (3): 172.
Klīniskais gadījums (turpinājums) • Grūtniecei tiek konstatēts izmainīts kariotips – līdzsvarota translokācija starp 14. un 18. hromosomas īsajiem pleciem: 46, XX, t(14; 18)(q 10; p 10). • Izmeklējot pacientes meitu no pirmās grūtniecības, tiek konstatēts nelīdzsvarota translokācija, kuras rezultātā meitenei ir 18. hromosomas īsā pleca trisomija (18 p+): 46, XX, +18, der(14; 18)(p 10; q 10). • Tiek veikta hordocentēze un konstatēts mozaīcisms: 46, XX, t(14; 18)(p 10; q 10)[23]/46, XX, +14, der(14; 18)(p 10; q 10)[2]. • Grūtniecība medicīnisku indikāciju dēļ tika pārtraukta. Izmeklējot augļa asinis atkārtoti (kardiocentēze), tika konstatēts izmainīts augļa kariotips (ar monosomiju 18 p): 46, XX, +14, der(14; 18)(p 10; q 10). • Īstais mozaīcisms? vai pseidomozaīcisms? vai mātes šūnu kontaminācija? vai himērisms? • Lai kā arī nebūtu, ir atrasta ģimene – kurai medicīniski ģenētiskā konsultēšana ir būtiski izšķiroša, plānojot ģimeni.
Mātes kariotips ar līdzsvarotu translokāciju t(14 p; 18 p).
Subtelomēru FISH izmeklējums mātei ar translokāciju t(14 p; 18 p).
Pa kreisi – augļa kariotips (kardiocentēze). Baltā bultiņa norāda uz 18. hromosomas īsā pleca delēciju (18 p-). Pa labi – kariotipa analīze meitai ar valodas attīstības aizturi. Baltā bultiņa norāda uz papildus ģenētisko materiālu 14. hromosomas īsajā plecā, kas patiesībā ir 18. hromosomas īsais plecs (18 p+).
Salīdzinošā genoma hibridizācijas metode Dzalbs A, Kalniete D, Krūmiņa Z, Bauze D, Miklaševičs E, Lugovska R (2012); nepublicēti dati Zēnam ar autismu kariotipa analīze: ish t(2; 12)(pter-, qter+; qter-, pter+)mat (submikroskopiska līdzsvarota translokācija mantota no mātes) SNParray analīze (Human. Cyto. SNP-12 Bead. Chip (Illumina) 22 q 11. 21 (~252. 146 bp) de novo duplikācija Ietver USP 18 (Ubiquitin specific peptidase 18; MIM*607057), LOC 100996415 (pseidogēns, nav raksturots), PPP 1 R 26 P 4 (Protein phosphatase 1, regulatory subunit 26 pseudogene 4), LOC 642643 (kodē proteīnu, nav raksturots), GGT 3 P (gammaglutamyltransferase 3 pseudogene), LOC 100132900 (Immunoglobulin superfamily member 3 -like), LOC 386610 (E 2 F transcription factor 6 pseudogene), LOC 727983 (Putative POM 121 -like protein 1 -like), BCRP 7 (Breakpoint cluster region pseudogene 7), LOC 100287541 (POM 121 transmembrane nucleoporin pseudogene), LOC 100996432 (Paternally-expressed gene 3 protein-like), DGCR 6 (Di. George syndrome critical region gene 6; MIM*601279, iesaistīts šizofrēnijas un Di. Džordža sindroma patoģenēzē) un, iespējams, PRODH (Proline dehydrogenase (oxidase) 1; MIM*606810, recesīvas mutācijas izraisa 1. tipa hiperprolinēmiju (MIM#239500) un heterozigotas mutācijas var būt šizofrēnijas (SCZD 4) cēlonis (MIM#600850)) gēnus
Attēls no: Patsalis PC lekcijas “Citoģenētiskā analīze” Eiropas Cilvēka ģenētikas biedrības / Lietuvas Cilvēka ģenētikas biedrības kursos laboratorijas medicīnas ģenētikas speciālistiem Viļņas Universitātes Medicīnas fakultātē, 29. 05. – 01. 06. 2009.
Attēls no: Apmācības kursiem par daudzrindu salīdzinošās genoma hibridizācijas metodes (array. CGH) Cyto. Genomics programmatūru un tās pielietojumu klīniskajā medicīnā (ģenētikā). Agilent Technologies Life Sciences and Chemical Analysis Group Ķīmisko analīžu metožu apmācību centrs; 19. 01. - 20. 01. 2012. Valdbronna, Vācija.
Dažas atziņas no: “Recommendations for genetic counselling relating to genetic testing (Euro. Gentest) (2009)” • Ģenētiskai konsultēšanai jābūt ģenētiskās testēšanas procesa integrālai sastāvdaļai. • Ja indivīds pieprasa [ģenētisko] testēšanu bez ģenētiskās konsultēšanas, medicīniskie fakti un iespējamās sekas ir jāpārrunā ar klīnicistu, kas nozīmē testu. • Gan ģenētiķiem, gan veselības aprūpes speciālistiem, kas nav ģenētiķi ir jābūt tiesībām atteikties veikt ģenētiskos testus bez pre-testa konsultācijas.
- Slides: 21