Curso anlisis de semen segn los criterios de

Curso análisis de semen según los criterios de la OMS 2010 (2ª parte) Mariam Cortés Tormo R 2 Análisis clínicos

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica ¿ Qué hacemos con la muestra recogida? { Licuefacción { Viscosidad { Apariencia { Volumen { p. H Identificar la muestra Introducirla en estufa 37ºC Si es posible someter a rotación con un agitador orbital Iniciar la observación preferiblemente a los 30 min Nunca después de 1 h.

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica La licuefacción se ensaya visualizando la muestra { Licuefacción Una muestra normal es una muestra licuada y homogénea la eyaculación el semen es una muestra semisólida { Tras Viscosidad coagulada { AApariencia los pocos minutos comienza a licuarse y a homogeneizarse {¿Qué Volumen pasa sí encontramos hilos de moco y cuerpos gelatinosos? { p. H Sin importancia clínica Dificultan el análisis Intentar eliminarlos a la hora de manipular la muestra para las diferentes pruebas

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica { Licuefacción Ocurre, normalmente, dentro de los primeros 15 min. a Tª ambiente Si en 60 min. no ha licuado hay que reseñarlo Si hay dudas sobre la licuefacción, se puede observar al microscopio Típica imagen de una muestra no licuada Manchas que recuerdan acúmulos de grasa

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica { Licuefacción ¿ Qué ocurre si no licua a los 60 min. ? Hay que licuarla Evitar la formación de burbujas para no alterar la muestra

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica { Licuefacción Ensayo de la viscosidad: { Viscosidad Con pipeta pasteur, dejando caer la muestra gota { Aparienciavarilla de vidrio en la muestra Introduciendo { Volumen { p. H

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica { Viscosidad Una muestra con viscosidad es homogénea. No confundir con licuefacción Alta viscosidad interfiere con las determinaciones de movilidad, concentración, anticuerpos antiespermatozoide y bioquímica Se elimina igual que en el caso de no licuefacción

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica { Licuefacción { Viscosidad { Apariencia { Volumen { p. H Un semen normal debería ser homogéneo, gris opalescente

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica { Licuefacción Mediante pesada: { Viscosidad Densidad = 1 { Apariencia Masa= Volumen { Volumen Pesar el recipiente (con etiqueta)= A { p. Hel recipiente con el semen = B Pesar (B – A) = nº gramos = nº ml No medir el volumen mediante transferencia a pipetas, jeringas o probetas, etc Recipientes de recogida graduados: La transferencia da lugar a mayores errores que con métodos anteriores Medida directa del volumen

Análisis de semen Evaluación inicial macroscópica { Licuefacción Refleja el balance entre las diferentes secreciones, { Viscosidad principalmente entre el p. H alcalino de las vesículas seminales y el ácido de la próstata { Apariencia Usar tiras 6. 0 -10 { Volumen Chequear el color antes de 30 sg { p. H Chequear las tiras reactivas con soluciones patrón de p. H Límite inferior de referencia = 7. 2 p. H < 7. 0 + oligo/azoospermia + volumen bajo Sugiere agenesia u obstrucción de vesículas seminales y/o conductos deferentes

Análisis de semen Evaluación inicial microscópica Microscopio de contraste de fases (se aconseja atemperado a 37 ºC Observación a 100 x (10 x 10) Agregaciones Aglutinaciones Células no espermáticas Observación a 200 x-400 x (10 x 20; 10 x 40) Estimación de la dilución para calcular la concentración espermática Movilidad espermática

Análisis de semen Evaluación inicial microscópica

Análisis de semen Evaluación inicial microscópica Muestra a 37º C Homogeneizar bien la muestra: { Ideal utilizar agitador orbital { Aspirar la muestra 10 veces con pipeta de plástico de 1, 5 mm diámetro Una falta de homogeneización provocará:

Análisis de semen Evaluación inicial microscópica Agregaciones { Adherencia de espermatozoides (inmóviles o móviles) a células no espermáticas o detritos { Son no específicas. Ninguna significación clínica

Análisis de semen Evaluación inicial microscópica Aglutinaciones {Espermatozoides móviles unidos a otros spz. Móviles {Son específicas. Pueden tener significación clínica {No son evidencia suficiente para deducir presencia de Ac antiespermatozoides, pero sí nos sugieren investigar su presencia

Análisis de semen Evaluación inicial microscópica Células no espermáticas

Análisis de semen Movilidad Clasificación PR: espermatozoides con movimiento progresivo, bien lineal o círculos amplios , independientemente de la velocidad

Análisis de semen Movilidad Protocolo Hacer doble contaje Contar al menos 5 campos/porta Contar al menos 200 spz/porta

Análisis de semen Movilidad Evaluación de resultados Se utiliza la gráfica del intervalo de confianza del 95% para diferencias entre dos porcentajes Es el máximo error esperado entre dos contajes en el 95% de los casos cuando el único error es atribuible al contaje Sí es >, preparar y contar 2 nuevas preparaciones de la muestra

Análisis de semen Movilidad Evaluación de resultados Ejemplo: Muestra (x 2) en porta 400 x IM : 1º =38 ; 2º =50 Supera la diferencia máxima admisible que está alrededor de 9

Análisis de semen Movilidad Evaluación de resultados

Análisis de semen Concentración { Observación previa { Dilución según observación { Contaje en cámara por duplicado { Evaluar resultados { Cálculo final de la concentración

Análisis de semen Concentración { Observación previa

Análisis de semen Concentración { Observación previa { Dilución según observación Material necesario: Pipetas de desplazamiento { Contaje en cámara directo por duplicado Pipetas automáticas normales, de { Evaluar resultados desplazamiento por aire { Cálculo final de la concentración Medio de dilución Weigman

Análisis de semen Concentración { Dilución según observación

Análisis de semen Concentración { Observación previa { Dilución segúnrecomendadas: observación Cámaras de recuento Hemocitómetro μm de profundidad) { Contaje en(100 cámara por duplicado Muestras { Evaluarfijadas resultados Cámaras de recuento NO recomendadas: { Cálculo final de la concentración Cámaras de pequeño volumen= pocos spz Cámaras llenadas por capilaridad= llenado desigual Muestras no fijadas= spz móviles

Análisis de semen Concentración { Contaje en cámara por duplicado

Análisis de semen Concentración { Contaje en cámara por duplicado Empezar a contar en la rejilla 5 hasta 200 spz Contar filas completas Si en una fila no llegamos a 200 spz seguir por la otra fila Si en mitad de una fila llegamos a 200 spz hay que seguir contando hasta acabar la fila Si con la 5 no completamos los 200 spz seguimos por la 4 y luego por la 6 Cuando se hace la dilución ½ hay que contar todas las rejillas

Análisis de semen Concentración { Contaje en cámara por duplicado

Análisis de semen Concentración { Observación previa { Dilución según observación { Contaje en cámara por duplicado { Evaluar resultados { Cálculo final de la concentración Si la diferencia entre los dos contajes supera el límite permitido habrá que empezar desde el principio, preparar dos nuevas diluciones y realizar de nuevo el doble contaje

Análisis de semen Concentración { Observación previa { Dilución según observación { Contaje en cámara por duplicado { Evaluar resultados { Cálculo final de la concentración

Análisis de semen Concentración { Valores límite y su IC 95%

Análisis de semen Concentración Cámara Makler { Fácil de usar { Se carga con 10μl de semen { Se cuenta toda la cuadrícula el resultado divido entre 10 es la concentración en millón/ml { Se evalúa a la vez concentración y movilidad ¿Por qué la OMS no aconseja su uso? { Volumen bajo (profundidad 10 μm) { Mayor dificultad movimiento spz { Menos exacto en concentración { Dificultad para fijar el cubre { Mayor riesgo de error Estandarización Control de calidad

Análisis de semen Morfología Protocolo { Muestras por duplicado { Limpiar vigorosamente los portas con papel e identificar

Análisis de semen Morfología Protocolo

Análisis de semen Morfología Protocolo { Tinciones

Análisis de semen Morfología Protocolo { Tinción Diff-Quik Observación en 100 x (inmersión) Contar al menos 200 spz Muestras por duplicado

Análisis de semen Morfología Clasificación

Análisis de semen Morfología Clasificación No se cuentan ni los flagelos ni las cabezas sueltas v

Análisis de semen Morfología Evaluación de resultados Si el error es mayor, no es necesario volver a repetir las preparaciones pero sí el contaje El límite inferior de referencia en este nuevo manual es del 4%, a diferencia del 15 % del manual anterior

Análisis de semen Vitalidad Fundamento Es una medida indirecta del estado de la membrana plasmática Espermatozoide intacto = membrana intacta Espermatozoide muerto = membrana dañada Debe realizarse rutinariamente en todas las muestras Es importante cuando la movilidad progresiva es < 40%

Análisis de semen Vitalidad Fundamento No existe un alto grado de correlación entre Test colorantes y Test hipoosmóticos ya que miden efectos característicos distintos de la membrana plasmática

Análisis de semen Vitalidad Fundamento colorantes

Análisis de semen Vitalidad Eosina

Análisis de semen Vitalidad Eosina/Nigrosina Mejor contraste de la imagen Permite guardar y reevaluar la muestra

Análisis de semen Vitalidad Imágenes de la coloración Si sólo se tiñe la zona del cuello o la cabeza tiene una ligera coloración rosa se considerará el spz como vivo

Análisis de semen Vitalidad Fundamento hipoosmótico

Análisis de semen Vitalidad Asociación de las dos técnicas Miden el estado estructural de la membrana plasmática Miden estado funcional de la membrana plasmática

Análisis de semen Vitalidad Evaluación de resultados El límite inferior de referencia en este nuevo manual es de 58% a diferencia del 75% del manual anterior

Análisis de semen Vitalidad Utilidad evaluación resultados movilidad descartar problemas recogida muestra sdme kartagener

Análisis de semen Anticuerpos antiespermatozoide

Análisis de semen Anticuerpos antiespermatozoide El nuevo manual de la OMS: { Sigue manteniendo la obligatoriedad de realizar el estudio de AAE en todos los seminogramas { Es importante su realización en movilidad baja o presencia de aglutinaciones { No siempre que hay aglutinaciones hay AAE { Se considera que existe un factor inmunológico cuando más del 50% de los spz móviles de un eyaculado presentan AAE { En casos positivos se estudiará: Isotipos presentes Intensidad de la respuesta Localización Ac { Encontrar Ac no implica necesariamente facto inmunológico. Realizar pruebas funcionales

Análisis de semen Anticuerpos antiespermatozoide

Análisis de semen Anticuerpos antiespermatozoide MAR test directo { Emplea semen completo { Test rápido, fácil y sensible { Menor información que IBT { Muestras de menos movilidad que IBT { Permite detectar Ig. G e Ig. A de origen secretor

Análisis de semen Anticuerpos antiespermatozoide MAR test directo

Análisis de semen Anticuerpos antiespermatozoide IB test directo { Matriz poliacrilamida { Emplea semen lavado { Detecta Ig. G como Ig. A tanto de origen secretor como no secretor { Más información al no interferir el líquido seminal

Análisis de semen Otras células Un número alto de estas células puede ser debido a: { Procesos inflamatorios { Alguna patología o alteración testicular

Análisis de semen Otras células

Análisis de semen Otras células Células espermatogénesis inmaduras

Fin segunda parte