Cultivo Primario Tcnicas de cultivo celular Cultivo Primario

Cultivo Primario Técnicas de cultivo celular

Cultivo Primario Etapas *Obtención de células n *Separación de tejido *Disección y/o desagregación *Cultivo

Cultivo Primario n Métodos para obtener cultivo *Fragmentos de tejido-migración de células *Desagregación mecánica o enzimática produce una suspensión de células que se adhiere al substrato.

Cultivo Primario n Desagregación enzimática n Tripsina n Colagenasa n Elastasa n Hialuronidasa

Cultivo Primario n n n Embrión de pollo Tejido embrionario se desagrega más fácil, mayor viabilidad celular, prolifera más rápido que tejido adulto Fácil de disertar Provee cultivos mesenquimales Órganos para generar tejidos especifico

Cultivo Primario n Explantos primarios n Fragmentos bien finos n Superficie con poco medio n Alta concentración de suero n Migración de células

Cultivo Primario n Subcultivo n Transición del cultivo n Más homogéneo n Caracterización y almacenaje

Cultivo Primario n n n Migración de fibroblastos Polaridad de movimiento Lámelapodio – polimerización de actina Adhiere a substrato Membrana plasmática opuesta se refracta ocasionando movimiento direccional Contacto con otra célula la polaridad se revierte y migración en dirección opuesta hasta cultivo en confluencia

Microscopio Invertido de Fase n n n Iluminación de arriba Observación de abajo hacia arriba Espesor del plato de cultivo limita la distancia entre objetivo y trabajo Máximo de observación 40 X Contraste de fase – luz arriba enmascarada por anillos obscuros difracción: células sin teñir se observa