CULTIVO CELULAR APLICACIONES EN MEDICINA Centro Comunitario de

CULTIVO CELULAR APLICACIONES EN MEDICINA Centro Comunitario de Sangre y Tejidos del Principado de Asturias. Unidad de Ingeniería Tisular Sara Llames

CULTIVO CELULAR: CELULAR mantenimiento, proliferación y/o diferenciación de células in vitro en un medio artificial. REQUERIMIENTOS MÍNIMOS DE UN LABORATORIO DE CULTIVO: Asepsia: cabina de flujo, esterilizador Incubador Nevera/congelador Baño agitador Centrifuga Microscopio Invertido

MEDIO DE CULTIVO: proporciona a las células los nutrientes necesarios. BASAL: medio definido, adecuado al tipo celular. SUERO: fuente de proteínas, minerales, lípidos, hormonas, mitógenos. ANTIBIÓTICOS ADITIVOS: hormonas, factores de crecimiento, etc. MEDIO DEFINIDO: sin suero, componentes conocidos, reproducible. MEDIO INDEFINIDO: con suero, variación entre lotes.

CONDICIONES DE CULTIVO: INCUBADOR p. H: 7. 4, tamponamiento 5% CO 2 temperatura: 37ºC humedad: 90 -95% CONTAMINACIÓN BIOLÓGICA: Bacteriana Fúngica MICOPLASMA

CULTIVO DE CONDROCITOS

Britterg y colaboradores 1994, condrocitos humanos autólogos cultivados para el tratamiento de lesiones completas de cartílago articular. Desde 1997 condrocitos comerciales. Elevado coste. Unidades hospitalarias de cultivo celular.

PROCESAMIENTO Y CULTIVO: Fragmentación mecánica (bisturí) Digestión enzimática (colagenasa) Cultivo en presencia de suero autólogo

CONTROLES: Bacteriológicos Micoplasma: ELISA, PCR, Fluorocromo Cultivo infectado por micoplasma Cultivo negativo

Producción de matriz cartilaginosa Tinción Safranina Tinción Azul Alcián Inmunodetección de Colágeno II

Estudio de normalidad celular Cariotipo Bandas G Hibridación Genómica Comparada.

Viabilidad Celular Azul Tripán

TRANSPLANTE Y/O CONGELACIÓN Transplante: suspensión celular en DMEM sin rojo fenol. Congelación para uso posterior.

CULTIVO DE QUERATINOCITOS PIEL ARTIFICIAL

CULTIVO DE EPITELIO AISLADO Biopsia del paciente Fragmentación mecánica Digestión enzimática Células aisladas de piel + 3 T 3 radiados Cultivo primario de queratinocitos Transporte y trasplante Cultivo secundario de queratinocitos Células del cultivo primario + 3 T 3 radiados

LIMITACIONES DEL EPITELIO CULTIVADO: Fragilidad Dispasa daña la membrana basal Formación de ampollas Infección Antisépticos Resultados clínicos pobres Escasa disponibilidad Coste elevado

INGENIERÍA TISULAR Epidermis Dermis Modelo de piel artificial completa destinado al tratamiento definitivo de grandes lesiones epiteliales

Cultivos Primarios Fragmentación mecánica Biopsia de piel Células aisladas de piel + 3 T 3 radiados Cultivo de queratinocitos 1ª Digestión T/E 2ª Digestión colagenasa Cultivo de fibroblastos

Cultivo Secundario Cultivo de queratinocitos Cultivo de fibroblastos Plasma humano Dermis artificial basada en plasma humano Piel cultivada

PREPARACIÓN DE LA PIEL ARTIFICIAL PARA TRASPLANTE

Biopsias procesadas (patologías)