Cuidados Bsicos no Laboratrio de Gentica Molecular Cuidados

Cuidados Básicos no Laboratório de Genética Molecular

Cuidados Básicos no Laboratório de Genética Molecular PROTEGER A AMOSTRA • DNAses/RNAses EVITAR CONTAMINAÇÕES • • Pontas de filtro Luvas 3 Zonas Distintas Descontaminar bancas. . . – Luvas – Cobertas de banca – Materiais M. B. Grade PRECISÃO MÁXIMA – Descontaminar • Confirmar volumes bancas. . . • Tempos e Temperaturas exactos

PREPARAÇÃO DE DNA E RNA • DNAses e RNAses – Omnipresentes em todo o material biológico: • Função biológica essencial – Presentes em todo o material de vidro e de plástico não tratado convenientemente – Presentes em químicos não “Mol. Biol. Grade” – Presentes nas mãos de todo o pessoal de laboratório

Descontaminar bancas e equipamento

Pontas para múltiplos volumes

Pontas com marcas de volume

Pontas para tubos longos

Pontas para Geis

Pontas para DNA Genómico

Os tubos eppendorf:

Preparação de Ácidos Nucleicos

Preparação das células: pulverização pós congelação

Preparação das células: homogeneização

Preparação das células do sangue: Centrifugação em gradiente descontínuo de densidade (Ficoll)

Preparação das células do sangue: Lise dos eritrócitos

PREPARAÇÃO DE DNA E RNA • DNA e RNA de mamiferos: – Lise suave e solubilização do DNA/RNA – Destruição enzimática das proteínas (proteases) – Destrição e precipitação quimica das proteínas (fenol/clorofómio/ácido isoamilico) – Precipitação dos ácidos nucleicos (Acetato de amónio / Acetato de sódio / Cloreto de sódio) – Redissolução dos ácidos nucleicos (prévia remoção de sais)

Método do fenol/ clorofórmio

Método do salting-out

PREPARAÇÃO DE DNA E RNA • DNA e RNA bacteriano – Como a dos mamíferos, mas é necessário ser eficaz na separação de polissacáridos, muito abundantes em algumas bactérias: • Cs. Cl • Enzimas: – Lisozima – Lisostafina – etc