Classe Bio 2 Briday Justine Joly Sandrine Lazzarin

Classe Bio 2 § Briday Justine § Joly Sandrine § Lazzarin Nathalie

La chromatographie d'exclusion

Principe § La chromatographie d'exclusion permet la séparation des molécules à travers un gel poreux en fonction du poids moléculaire de la protéine. § En fonction: -de la taille § -de la forme § -poids moléculaire

Il existe 2 types de phases § La phase stationnaire: elle est constituée de billes de polysaccharide § La phase mobile: elle est constituée d'un éluant (eau, tampon p. H), il sert à entraîner les molécules du mélange.

Passage à travers la colonne § Les grosses molécules sont éluées en premier car leur volume est supérieur à celui du volume des billes. § Les petites molécules sont exclus en dernier de part leur petit volume, elles subissent des frottements, leur migration est freinée.

Durée de rétention dans la colonne § La durée de séjour dans la colonne augmente lorsque le poids moléculaire de la molécule diminue

Choix du type de gel § Le choix du type de gel est effectué selon le domaine de fractionnement.

Qu'est ce que le domaine de fractionnement? § C'est la gamme des masses molaires possibles pour lesquelles il y a : -diffusion partielle -diffusion totale -englobement de la masse molaire de la molécule

Les différents volumes § Ainsi on note plusieurs volumes lors de la chromatographie: -le volume d'élution de la molécule -le volume d'exclusion du gel (volume d'élution d'une molécule non retardée par le gel) -le volume total du gel qui correspond au volume des billes.

Conclusion § La chromatographie d'exclusion va permettre la séparation de différentes molécules selon leur taille.