Citologa del ciclo estral Prctica de laboratorio de

Citología del ciclo estral Práctica de laboratorio de Biología de Animales III Tanya González Martínez

Objetivos: • • • Conocer una técnica útil en el diagnóstico de la etapa del ciclo sexual en que se encuentran las hembras de los mamíferos. Aprender a identificar las características citológicas de cada etapa del ciclo estral. Identificar las aplicaciones de la técnica de tinción de Papanicolaou y su importancia en el diagnóstico de salud de los seres humanos.

Citología Exfoliativa: Importancia • Diagnóstico funcional: – Grado de proliferación del epitelio vaginal – Inferencias sobre el metabolismo hormonal (ovárico) – Etapa de vida (pubertad, ciclo estral y gestación) • Diagnóstico patológico: – Flora bacteriana – Detección de células tumorales neoplásicas (carcinomas) – Parásitos (trichomoniasis, amibiasis, coccidiosis, toxoplasmosis, trichuriasis, demodicosis, etc) – Virus (enfermedad de Carre, encefalitis viral, viruela aviar, rabia, PHV) – Micosis (candidiasis, aspergilosis, hitoplasmosis)

Aspectos importantes a considerar: • Historia clínica – – Fecha y duración del último estro Número de gestaciones Aplicación de fármacos u hormonas Tipo de alimentación • Buena toma de muestra: – Frotis vestibular – Frotis vaginal – Tinción específica (Papanicolaou, Harris, Wright’s, Shorr’s, Romanowsky, etc)

Citología exfoliativa: fundamentos La pared vaginal sufre cambios cíclicos que corresponden con los cambios del ciclo del endometrio. Estos cambios se hallan bajo la influencia de las hormonas ováricas. Las fases del ciclo estral pueden identificarse a través de las células descamadas obtenidas de la vagina.

Citología exfoliativa: fundamentos El ciclo hormonal (hipofisiario y ovárico) está estrechamente relacionado con los cambios en el epitelio del tracto reproductivo

Efecto de los estrógenos Los cambios en las distintas fases indican que el efecto de los estrógenos sobre la mucosa vaginal es mucho más pronunciado que el de la progesterona. Los estrógenos son responsables de los procesos de: – Proliferación – Diferenciación (incremento en el tamaño y cambio de forma de la célula, presencia de precursores de queratina y degeneración del núcleo –picnosis-) – Exfoliación de las células El grado de cambios en el epitelio vaginal y en el frotis refleja la cantidad de estrógenos circulante (mayor concentración de estrógenos en proestro y estro).

Frotis vaginal: Índices de medición de tipos celulares Se han creado varios índices para describir las células que se observan en frotis vaginales: • Índice eosinofílico (EI) • Índice de células superficiales (SCI) • Índice cariopicnótico (KPI) *¿en qué consiste cada índice?

Frotis vaginal: Los cinco tipos celulares del epitelio vaginal Aunque los cambios inducidos en las células vaginales son continuos, las células en un frotis pueden ser clasificadas en cinco tipos principales: • • • Células basales Células parabasales Células intermedias pequeñas Células intermedias grandes Células superficiales

Identificación: Células basales • Raramente se ven en un frotis, son las más pequeñas (10 a 12 micras) del epitelio plano estratificado observables en un frotis. Uniformes en tamaño y de forma redonda u oval. Citoplasma pequeño, espeso y homogéneo con bordes lisos. Núcleo redondo, central, relativamente grande ocupando casi todo el citoplasma. • Se observan ocasionalmente en frotis normales, siendo más comunes en ulceraciones de la mucosa

Identificación: Células parabasales e intermedias grandes • También llamadas “células espumosas” • Características del diestro temprano, metaestro y anestro. • Se originan en la capa profunda del epitelio escamoso estratificado. 15 a 25 micras diámetro. Citoplasma con borde liso y cantidad variable dependiendo de su grado de maduración. Núcleo grande (8 -12 micras), redondo u oval, central. • Degeneran o maduran rápidamente con una irritación excesiva o una reacción hormonal estrogénica. • Tipo celular predominante en organismos prepúberes.

Identificación: Células intermedias pequeñas • Transición entre las parabasales y las superficiales • Tamaño igual o menor que las superficiales, dependiendo su grado de maduración (20 a 40 micras) • Forma poligonal, con bordes usualmente angulosos y doblados

Identificación: Células superficiales • Son las células epiteliales más grandes observadas en un frotis (40 a 60 micras). • Se originan en la capa madura más elevada del epitelio escamoso estratificado. • Se observan solas, de forma poligonal con variaciones y bordes angulosos y doblados. Algunas presentan prequeratinización y se llaman células precornificadas. • Sin vacuolas. Núcleo pequeño no mayor a 6 micras. • Comunes en la etapa preovulatoria, después de una terapia estrogénica, o en caso de un tumor ovárico.

Frotis vaginal: Los tipos celulares accesorios El frotis vaginal contiene otras células que no tienen su origen en los epitelios que cubren el aparato genital. Entre ellas están: • Leucocitos (linfocitos, monocitos, basófilos, acidófilos y neutrófilos) • Eritrocitos (“huecos”) con bordes crenados • Células plasmáticas. Núcleo de “rueda”, excéntrico.

Tipos celulares del ciclo estral de la rata

Protocolo de la práctica: • Se practicará previamente la técnica para realizar el frotis vaginal de rata en individuos anestesiados. • Se tomarán muestras durante cinco días (de lunes a viernes) con los individuos que se encuentran asignados para ello en el bioterio (ratas o hámsters). Atn. con el M. V. Z. Mario Solórzano • De cada toma muestra habrá que realizar una preparación teñida con azul de toluidina o azul de metileno, observarla al microscopio y realizar esquemas de los tipos celulares observados. Es recomendable tomar fotos de la preparación y fijarla con citospray para futuras observaciones. • Es importante registrar la asistencia al bioterio firmando la hoja de control.

Resultados 1. Realicen dibujos a mano de tus observaciones diarias y describe las características de cada una de las etapas indicando qué poblaciones celulares se encuentran en cada una de ellas. Puedes acomodar tus resultados en un cuadro donde muestres la etapa del ciclo estral, el día, el esquema o dibujo y una foto. 2. Construyan una gráfica en donde esbocen el patrón general del perfil hormonal a través del ciclo estral de la rata o el hámster.

Ejemplo: Ciclo estral canídeo Después de hacer el seguimiento de la citología vaginal de la perra se obtuvieron los siguientes porcentajes celulares para cada etapa del ciclo:

Tinción de Papanicolaou

Proestro Al principio hay células parabasales e intermedias pequeñas, eritrocitos en número variable y gran cantidad de neutrófilos. Índices EI y SCI relativamente bajos. Frotis poco claro (“sucio”)

Proestro tardío Predominan células superficiales e intermedias grandes, núcleos celulares picnóticos, disminución de la cantidad de eritrocitos y neutrófilos. Índices EI y SCI incrementan progresivamente. El frotis aparece sucio debido a detritus e hilos de mucina.

Estro Más del 90% de las células están queratinizadas y anucleadas. Células epiteliales cornificadas con núcleos picnóticos y margen angular. Índices EI y SCI por arriba del 90% Frotis de aspecto claro, con o sin eritrocitos.

Estro tardío Las células tienden a aglomerarse formando capas de apariencia arrugada. Disminución abrupta de células cornificadas días después del pico de LH Después de la ovulación disminuye la cantidad de estrógenos, por lo que el epiteli vaginal disminuye su grosor y en el frotis vuelven a aparecer células parabasales y neutrófilos.

Diestro o Metaestro Células no cornificadas y neutrófilos. Al principio existen gran muchas polimorfonucleares y muy pocas células superficiales. Pocas células parabasales e intermedias que aumentan progresivamente. Frotis similar al del proestro (Laboratorio de B. De la Reproducción UAM, 40 x) Neutrófilos en cantidades variables, algunos dentro de células epiteliales, conformación conocida como las células del diestro o metaestrales. Ausencia de eritrocitos Índices EI y SCI descienden abruptamente.

Predominan células de la capa profunda de la mucosa vaginal (células parabasales), hay algunas células queratinizadas redondas u ovaladas de núcleo bien definido y tamaño uniforme. Presencia de neutrófilos y monocitos, poca cantidad de detritos y algunas bacterias en el fondo. Anestro

Anestro y Células parabasales

Cuestionario (1 a parte) • • • Describe el ciclo estral de la rata y/o hámster ¿Por qué las hembras de estas especies se “ciclan” al mismo tiempo cuando comparten el mismo espacio físico? ¿En qué otras especies ocurre este fenómeno? ¿Qué factores externos pueden afectar el ciclo y por lo tanto el diagnóstico (alimentación, temperatura, etc) en distintas especies de mamíferos?

Cuestionario (2 a parte) 4. ¿Cuáles son las diferentes aplicaciones que tiene esta técnica? 5. ¿Cuál es el objetivo del examen de Papanicolau y con qué frecuencia debe realizarse? Explica en qué consiste esta prueba en las mujeres. ¿Cuál es la prueba equivalente en los hombres y cada cuándo debe realizarse? 6. Investiga cómo se observan los resultados de los exámenes de este tipo. ¿Qué parámetros se evalúan?

Cuestionario (2 a parte) 7. ¿Cuáles son las características que describen al Virus de Papiloma Humano (PVH)? ¿Cuántos tipos de PVH existen, cuáles de ellos son los de mayor riesgo? 8. ¿Por qué vías de contagio se puede transmitir el PVH y cómo se manifiesta? ¿Qué consecuencias puede traer la adquisición de este virus, por qué es tan riesgoso para la salud? 9. Investiga los datos estadísticos sobre la incidencia de enfermedades provocadas por PVH en México y el Mundo. Utiliza fuentes confiables. 10. ¿Creen que sea importante prevenir el contagio? ¿De qué forma?

Glosario y Bibliografía Hernández Pichardo, E. , Fernández Reyes, F. y Cortés Suárez S. Fundamentos teórico prácticos de la citología exfoliativa en medicina veterinaria. CBS, Manual 5. UAM Unidad Xochimilco. Agradecemos especialmente la amable colaboración y participación del M. V. Z Mario Solórzano, Jefe del Bioterio de la Facultad de Ciencias y de todo su equipo de trabajo.