Chromatography Chromatography Gas Chromatography Adsorption Liquid Chromato Partition

Chromatography 의 분류 Chromatography Gas Chromatography Adsorption Liquid Chromato. Partition Supherical Fluide Ch. Size Exclusion Ion Exchange Gel Filteration Gel Permeation

Normal Phase(Adsorption 흡착)

Reverse Phase( Partition 분배)

Size Exclusion (크기배제)

HPLC 분리이론 v Resolution : 분리능(Rs) v Retention Time : 머무름 시간(t. R), RT v Selectivity : 선택도(α) v Capacity factor : 분리계수(k´) v Efficiency : 분리효율(N) v (N=Theoretical Plate Number)

Solvent Strength (용매 강도) v 용매강도는 역상, 순상에 따라 서로 반대의 강도를 가지며, 유기용매와 물의 혼합시 물의 함량이 많을수록 성분의 머무름 시간(Retention Time) 은 길어짐. Solvent Strength Reversed Phase Normal Phase Water DMSO Methanol Acetonitrile Tetrahydrofuran Haxane 1 -Chlorobutane Methylene Chloride Acetonitrile

Solvent Delivery Pump(펌프)

Injector(주입기) Manual Injector Autosampler

Injector 의 원리

Column(고정상)

Column(고정상)

Packing Material(충진제)

Detector(검출기)

UV/Vis 검출기 v 사용범위 v v v HPLC 검출기 중 가장 많이 사용. 분자구조내에 Aromatic Ring , Double Bond, Triple Bond , UV 유도체를 갖고 있는 화합물. 사용이 간편하고, Baseline 안정화 시간이 짧다. Functional Group Chromophore Wavelength (nm) Ether Olefins Thioether -O-C=C-S- Amine Thiol Disulfide -NH 2 -SH -S-S- 185 194 215 195 194 255 208 260 190 Ketone Thioketone Esters Aldehyde Carboxyl Nitrite >C=O >C=S -COOR -CHO -COOH -ONO Oxalic Acid Azo Nitroso Nitrate HOOC-COOH -H=N-N=O -ONO 2 270 -280 205 280 -300 200 -210 220 -230 300 -400 250 285 -400 302 270 Bromide Iodide Azide -Br -I >C=N-

녹차의 HPLC분석(예시) v Catechine Standard

녹차의 HPLC분석(예시) v Epigallocatechine gallate Standard

Vit-C의 HPLC정량 v 표준용액의 조제(ST) Ascorbic acid 10. 0 mg H 2 O qs 100 ml 시료의 조제(SA) 비타500 5 ml H 2 O qs 100 ml

Vit-C 분석조건 및 계산 v 분석조건 Column(Stationary Phase) ; u-Bondapak C 18 Mobile phase; 0. 05 M KH 2 PO 4: ACN= 60: 40 Flow rate; 1. 0 ml/min Detector; 254 nm SA peak area ☓ ST취한량 %= ST peak area ☓ SA취한량 평균중량 ☓희석배수 ☓ ☓역가 기준량