Chromatografie http www youtube comwatch vYBrd FDHTQO 4

Chromatografie http: //www. youtube. com/watch? v=YBrd. FDHTQO 4

Chromatografie Schrijven met ‘kleur’ Papier- & dunnelaagchromatografie Kolom-chromatografie Gas-chromatografie

Papierchromatografie • • • Het papier wordt in een vloeistof gehangen (= de loopvloeistof). De loopvloeistof wordt opgezogen door het papier. De stoffen in het mengsel lossen in de loopvloeistof op & zullen mee omhoog getrokken worden. Doordat niet alle stoffen even goed oplossen ontstaat een vlekkenpatroon. De stoffen in het mengsel zijn geheel of gedeeltelijk gescheiden.

Papierchromatografie, Rf-waarde (rate of flow) Rf = a/b • Groene kleurstof: a = 3, 3 b = 8, 3 Rf = 3, 3/8, 3 = 0, 40 • Rode kleurstof: a = 5, 0 b = 8, 3 Rf = 5, 0/8, 3 = 0, 60 • Blauwe kleurstof: a = 6, 5 b = 8, 3 Rf = 6, 5/8, 3 = 0, 78

Dunnelaag-chromatografie De stationaire fase is een dunne laag aangebracht op een glasplaat. – Rf = a/f – Rf = b/f

Verdelingsconstante Kv

Verdelingsconstante Kv • Mobiele fase • Stationaire fase • Kv =[A]s/[A]m KA = 0, 33 KB = 1, 0 KC = 3, 0

Kolomchromatografie • Het kolommateriaal bestaat uit poreuze korrels. • De poriën zijn zodanig van grootte dat moleculen tot een molecuulmassa van 6000 u kunnen binnendringen en grotere moleculen niet. • Dithioniet (mol. massa 128 u) zal dus wel de gelkorrels kunnen binnengaan maar hemoglobine niet (mol. massa 65000 u). • Hierdoor zal dithionietworden opgehouden bij het doorstromen en zal gescheiden worden van hemoglobine. • Hemoglobine komt als eerste van de kolom.

Kolomchromatografie • Retentietijd: benodigde tijd om de kolom te passeren

Gaschromatografie (GLC)

Gaschromatografie (GLC) • Capillaire kolom – Mobiele fase: dragergas – Stationaire fase: vloeistoffilm

Gaschromatografie (GLC)

Gaschromatografie (GLC) • • • Samenstelling van draaggas wijzigt. Zo ook de warmtecoëfficientvan het gasmengsel. Deze wijziging wordt omgezet in een electrisch signaal.

Gaschromatografie • Retentietijd: benodigde tijd om de kolom te passeren

Gaschromatogram • Aanstekergas: – ethaan – propaan – butaan – methylpropaan – pentaan

Gaschromatogram • Wijnaroma: – cyclopentaan – 1 - ethanal – ethylethanoaat – ethanol – 2 -methylpropanol – 1 -butanol – 2 -methylpropylethanoaat – ethylbutanoaat – ethyl-2 -methylbutanoaat – benzaldehyd – limoneen – 1 -hexanol – ethylhexanoaat • • • Elke piek in het chromatogramstaat voor een andere stof. De oppervlakte van de piek geeft aan hoeveel van die stof in de wijnaroma wordt aangetroffen. Deze methode is zeer gevoelig: tot éénnanogram van een verbinding kan worden aangetoond.