CAT devant une selle Dr LEHBILI S Plan

CAT devant une selle Dr LEHBILI . S

Plan : I/Introduction II/CAT 1/ Fiche de renseignement 2/Examen macroscopique 3/Examen microscopique 4/Techniques de concentration 5/La coloration 6/la culture 7/Autres III/Conclusion

I/ INTRODUCTION Selles : moyen d’élimination dans le milieu extérieur M. E. E et identification des parasites et champignons vivant ds le T. D

II/CAT devant une selle

1/Fiche de renseignement Clinique Statut immunitaire Age Etat générale Dlr abdominale Fièvre HIV ++++ CD 4+ enfant ≤ 2 ans N -Né≤ 6 mois Vieillard Immunosuppresseur corticoïdes Traitement Biochimie Endoscopie Biopsie Autres examens Origine Voyage Zone d’endemie

WILAYA DE CONSTANTINE CENTRE HOSPITALIER UNIVERSITAIRE DR. BENBADIS DE CONSTANTINE LABORATOIRE DE PARASITOLOGIE ET MYCOLOGIE Examen Demandé : ……………………………… N° : ……… Service Demandeur : ……………………Médecin traitant : ………. . Nom : …………………… Prénom: ……………. Age : ………. Adresse: …………………………………………. . Profession : ………………………………………… SOMMAIRE D’OBSERVATION: Signes cliniques : ……………………………………… Signes radiologiques : …………………………………… Bilan: …………………………………………… Traitement : …………………………………………… RESULTATS: Examen direct: Macroscopique: ………………………………… Microscopique: …………………… LE MEDECIN: Constantine, le………….

2/ Examen macroscopique ü Consistance ü Couleur parasitaires ü Eléments surajoutés ü Présence de sang, mucus… -anneaux de Tænia -adules d’Ascaris -adules d’oxyures

3/ Examen microscopique Na. CL 9‰ Verre à pied selle Microscope optique Lame + lamelle Etat frais (G Χ 10, GΧ 40)

3/ Examen microscopique � Colorations instantanées Vacuole en brun du Pseudolimax butschlii Lugol (Iode métalloïdique, KI) MIF (Merthiolate Iode Formol) K+FV → vert jaune → brun Bailenger (cristal violet, Fuchsine b. , alcool, phénol) K + FV → Cyt. : Rouge, structures nucléaires : noires G X 10, X 40

Examen microscopique

4/ Les techniques de concentration �La concentration = toute technique permettant de réunir dans un faible volume les éléments parasitaires initialement dispersés dans une grande masse de fèces. �Un examen parasitologique bien conduit doit comporter une ou plusieurs techniques de concentration.

4/ Les techniques de concentration �Techniques physiques : Différence de densité entre les éléments parasitaires et les débris alimentaires par rapport à un liquide de dilution ➢ Techniques de sédimentation : utilisent un liquide dont la densité est inférieure à celle des éléments parasitaires (Techniques peu utilisées) ➢ Techniques par flottation : utilisent un liquide de densité supérieure à celle des éléments parasitaires qui se concentrent à la surface ex. Willis, Janeckso-Urbanyi… Ces techniques concentrent surtout les œufs.

4/ Les techniques de concentration �Techniques physiques : Méthode de WILLIS � On utilise une solution saturée du Na. Cl à 25%. Indication: Œufs d’Ankylostomes Œufs d’Hymenolepis nana

Na Cl 25% Tamisage 15 -45 mn

Les techniques de concentration

Méthodes physiques Technique de flottaison Densité réactif ►densité parasite 15 mn

4/ Les techniques de concentration Techniques physico-chimiques ou diphasiques : � Mettre les selles en présence de 2 phases non miscibles : une aqueuse et une organique (éther). � En plus de l’action dissolvante de l’éther, la mise en jeu de 2 phases non miscibles réalise pour chaque élément fécal un coefficient de partage dont la valeur dépend de sa balance hydrophile / lipophile permettant ainsi de concentrer les éléments fécaux dans le culot. � Ex. Ritchie, Bailenger, MIF concentration, Teleman-Rivas… � Bonnes techniques de concentration des œufs et des kystes.

4/ Les techniques de concentration Techniques physico-chimiques ou diphasiques : Le mode opératoire est le même pour toutes les techniques diphasiques seul diffère la solution de dilution Méthode de Bailenger : tampon acéto-acétique à ph 5 Méthode de Ritchie simplifiée: formol 10% Méthode de Telemann Méthode de Faust et Ingalls

Diluant Ether sulfurique Homogénéiser Tamiser Centrifugation 1500 t/mn pd 3 mn

Techniques diphasiques Technique Diluant TELEMANN HCl BAILENGER Tampon acétoacétique p. H 5 Kystes de protozoaires RITCHIE SIMPLIFIÉE Formol à 10% Œufs d’helminthes et +++ kystes de protozoaire FAUST ET INGALLS Sulfate de sodiumà 10 - Œufs d’Ankylostomes 12% et Tricocéphale JANECKSOURBANYI Iodomercurate de potassium Indication Valeur Abondonée Historique Œufs d’helminthes +++++

4/ Les techniques de concentration Techniques spéciales : Méthode de kato : Elle permet de mettre en évidence uniquement les œufs d'helminthes dans une quantité relativement importante de selles. Méthode de Baermann : Technique de référence pour le diagnostic d'anguillulose. Elle permet la mise en évidence de larves rhabditoïdes. � La recherche de ces larves est basée sur la propriété d’hydro-thermo-tropisme positif des larves

Technique de BAERMANN et LEE 2 -3 h 10 ml Centrifugation 1500 t/mn pd 3 -5 mn

5/ La coloration : q l’examen parasitologique après coloration a des indications, en effet il est d’un grand secours ds l’identification et le diagnostic différentiel entre espèce amibe essentiellement sous forme vegetative, il est indispensable aussi pr le diagnostic de certains protozoaire tel que cryptosporidies et microsporidies q On a des colorations instantanées entre lame et lamelle, les coloration de frottis sec ou humide et les colorations spécifiques

Coloration d'un frottis fécal humide : Méthode de KOHN: (noir chlorazol) Elle colore le cytoplasme des amibes en gris clair sur fond grisâtre et les structures nucléaires en noir. Méthode de HEIDENHAIN ( l’hématoxyline ferrique) Les structures nucléaires ressortent en noir sur fond grisâtre.

Coloration d'un frottis fécal sec: Méthode de BROOK et GOLDMAN : permet d’observer des trophozoïtes dans un prélèvement à distance. Le réactif de fixation est l’alcool polyvinylique. Il suffit de confectionner un frottis fécal, de rajouter 3 gouttes de fixateur et laisser sécher une nuit à 37°, on peut ensuite transporter les lames pour les colorer au laboratoire.

Colorations spécifiques : La coloration au Ziehl Nelseen : �Elle est spécifique pour la coloration des oocystes de Cryptosporidium sphérules roses plus au moins intense sur un fond vert. �Elle est surtout pratiquée pour les selles diarrhéiques

Colorations spécifiques :

Colorations spécifiques : Méthode de Trichrome de gomori

6/ La culture : C’est un bon moyen de diagnostic lorsque les formes végétatives sont rares dans les selles. La culture réussit bien avec les formes végétatives quand elles sont encore vivaces et donc on doit opérer avec des selles fraîchement émises.

6/ La culture : Phase liquide Élément figuré Phase solide

6/ La culture : Milieu polyxénique diphasique de DOBELL et LAIDLAW � le plus utilisé, comporte une phase solide (sérum de cheval coagulé en plan incliné) et une phase liquide contenant du soluté de Ringer, du sérum de cheval et de l’amidon de riz. �L’incubation a lieu à 37°, la lecture s’effectue au bout de 48 à 72 heures, et les repiquages tous les 2 à 3 jours

6/ La culture : � Les milieux artificiels axéniques sont des milieux complexes semi-synthétiques. Le milieu de Diamond est le plus utilisé

7/ Autres : �La recherche de coproantigène: Des techniques immunoenzymatiques de type ELISA permettent de recher dans les selles des antigènes spécifiques de l’espèce E. histolytica.

7/ Autres : Biologie moleculaire: Les méthodes de PCR sont dans la majorité des cas lourdes, longues et coûteuses

III/ Conclusion: �Prescription correcte �Renseignements cliniques (âge , symptômes, voyage …. . ). �Prélèvements (condition, préparation, délai p/r examen …. ). �Examens (technique, matériel, compétence …). �Résultat et interprétation.

III/ Conclusion : Un examen isolé négatif n’a aucune valeur d’élimination. �Examen doit être rapidement exécuter. �Chaque parasite ou groupe de parasites a sa technique spécifique.

III/ Conclusion Limites v Cas d’oxyures marge anale v Cas de Tænia saginata scotch test v Phase coprologiquement - Giardiose, Amibiase muette répéter l’examen 3 X v. Phase de migration larvaire Dg. Sérologique v Stade avancé de la parasitose œuf de Schistosomes emprisonnés ds les muqueuses