carbohydrate staining monosaccharide disaccharide oligosaccharide polysaccharide Neutral 1

탄수화물 염색 (carbohydrate staining)

탄수화물의 분류 • 단당류 (monosaccharide) • 이당류 (disaccharide) • 올리고당류 (oligosaccharide) • 다당류 (polysaccharide)

상피층에 나타나는 점액 원자단 Neutral (1: 2 glycol) carboxylated (1: 2 glycol, COOH) sulfated(1: 2 glycol, COOH, OSO 3 H) 명칭 gastric mucin sialomucin sulfated sialomucin 분포 위점막, 전립 선 소장점막, 침 샘 대장점막

결합조직 점액 (acid- mucopolysaccharide) 원자단 Carboxylated (COOH) 명칭 분포 hyaluronic acid 태반, 피부결합조직 chondroitin sulfate A & B 연골, 심장판막 Sulfated (COOH & OSO 3 H) chondroitin sulfate B, heparin sulfated (OSO 3 H) keratosulfate 대동맥, 비만세포 연골, 추간판

Periodic acid schiff reaction (PAS) For Neutral polysaccharide

PAS 염색 양성반응 물질 • Glycogen • neutral mucosubstance • basement membrane • reticulum fiber and collagen fiber • amyloid • fungus

Periodic acid schiff reaction(PAS)

Periodic acid schiff reaction(PAS) 기저막(PAS염색) 신장의 사구체

Periodic acid schiff reaction(PAS) Fungus Lung candidiasis

고정 및 기법 • Fixative - 10% alcoholic formalin, absolute alcohol, carnoy 용액 등 • Paraffin cut section - 4 -6 μm • Control - alcohol용액에 고정된 liver, 정상피부조직

방법 1) 2) Deparaffinize and hydration washing Diastase 소화용액과 buffer solution 을 혼합한 후 37℃에서 1 hour incubation하여 glycogen을 제거 3) Tap water 10 min washing 4) 1 % periodic acid solution 10 min oxidation 5) Tap water 10 min washing 6) Schiff reagent 25 min washing 7) Tap water 10 min washing 8) Harris hematoxylin 2 min stain 9) Tap water washing 10) 1% HCl alcohol 3~5 회 dip 11) Tap water 10 min washing 12) Dehydration clearing mounting

<PAS> <diastase-PAS> 글리코겐증(glycogenosis) 환자의 간조직

방법 1) Deparaffinize and hydration washing 2) Mayer hematoxylin 용액에 15 min nucleus stain 3) Tap water 15 min washing 4) Best의 carmine solution, 15~30 min stain 5) 수세하지 않고 감별용액에 10 sec 가량 differentiated 6) Dehydration : rinse in fresh alcohol 7) clearing mounting 감별용액 • absolute alcohol ------- 20 ml • Methyl alcohol ------- 10 ml • D. W. ----------- 25 ml

Mucicarmine 저장액 • Carmine (Oil No. 75470) ------ 3. 0 gm • Aluminium chloride ----- 1. 5 gm • D. W. ----------- 6. 0 ml • 삼각플라스크에 위의 시약을 넣고 가열하여 dark purple 색의 syrup 용액으로 만든다. • 50% alcohol 100 ml를 붓고 overnight 후 filter

방법 1) Deparaffinize and hydration washing 2) Weigert hematoxylin 10 min stain 3) Tap water 10 min washing 4) Mucicarmine 용액 30~40 min stain 5) D. W. 2 - 3회 washing 6) 0. 25% metanil yellow solution 1 min stain 7) D. W. 2 - 3회 dip washing 8) Dehydration clearing mounting

산성 점액물질 (acid mucosubstance) 염색 • 정상적으로 인체에 존재 - 혈관벽에는 정상적으로 hyaluronic acid, chondroitin sulfate A와 C, dermatan sulfate, heparin sulfate 같은 acid mucosubstance가 존재 • 이 물질은 유전적 대사이상으로 그 양이 증가 - collagen disease의 경우, 양이 증가 - 죽상경화증 (atherosclerosis)의 조직 부위에 증가

• 보통 alcian blue p. H 2. 5 염색액을 사용 carboxylated와 sulfated acid mucosubstance를 증명 • alcian blue p. H 1. 0 염색액을 사용하여 sulfated acid mucosubstance를 증명 • alcian blue-PAS 이중 염색으로 acid mucosubstance는 blue, neutral mucosubstance는 reddish purple로 감별

고정 및 기법 • Fixative -10% Neutral buffered formalin, - Bouin’s • Paraffin section - 4 -6 μm • Control (대조조직) - Small Intestine, salivary gland, appendix, or colon

방법 1) Deparaffinize and hydration washing 2) 3 % glacial acetic acid solution에 5 min간 감작 3) 1 % Alcian blue solution 30 min stain 4) Tap water 5 min washing 5) Nuclear fast red solution 5 min 대조염색 6) Tap water 3~5회 dip (가급적 짧고 신속히 진행) 7) Dehydration clearing mounting Alcian blue solution (p. H 2. 5) - Alcian blue, 8 GX (C. I 74240) ---- 1. 0 gm - 3% glacial acetic acid ----- 100 m • 용해한 후 여과하고 진균 방지를 위해 thymol 결정을 조금 첨가 • 용액은 2개월 간 안정

<HE> <Alcian blue>

Alcian blue (p. H 1. 0) stain for Sulfated acid mucosubstance 방법 1) Deparaffinize and hydration washing 2) Alcian blue p. H 1. 0 solution에 30 min stain 3) 0. 1 N HCl solution으로 신속히 헹군다. 4) 여과지에 물기를 흡착한 후 건조시킨다. 물에 수세하지 않 는 것은 p. H의 변화로 인한 비특이성 염색반응을 일어나지 않도록 5) Nuclear fast red solution 5 min counterstain 6) 증류수로 신속히 헹군다. (가급적 짧고 신속히 진행)

• sulfated acid mucosubstance -- blue • nucleus ------- pinkish red • cytoplasm ------ pale pink Alcian blue (p. H 1. 0)

1) Deparaffinize and hydration washing 2) 3% acetic acid solution에 3 min 간 처리 3) Alcian blue solution (p. H 2. 5)에 30 min간 stain 4) Tap water 10 min washing 후 증류수로 여러 번 헹군다. 5) 0. 3% sodium carbonate solution에 10 min 간 처리한다. (이 때 alcian blue는 약알카리 처리로 불용성이 된다. ) 6) Tap water 10 min washing 후 증류수로 여러 번 헹군다. 7) 1 % periodic acid solution에 5 min간 산화시킨다. 8) 증류수에 2~3회 수세한다. 9) Schiff reagent에 10 min stain 10) Sulfurous rinse solution 에 2 min 씩 3회 처리한다. 11) Tap water 10 min washing 12) Harris hematoxylin 용액에 3 min 간 핵염색을 한다. 13) Tap water 1 min washing

• Acid mucosubstance -------- blue • Epithelial mucin --------- purple • Cartilage ------------ purple • Neutral mucosubstance, PAS 양성물질 -- reddish purple • nuclei ------------ dark blue • cytoplasm, background ----- pale pink

High Iron Diamine(HID) – Alcian blue for sulfated and carboxylated mucins • 용액 내에서 생성된 염기성염료가 점액물질의 산성기와 이온결합 • HID solution • N, N-dimethyl-meta-phenylenediamine-dihydrochloride • N, N-dimethyl-para-phenylenediamine-dihydrochloride • Distilled water • Freshly prepared 60% ferric chloride == Dissolve the two diamine salts in the distilled water and then add the ferric chloride solution. • Alcian blue solution (p. H 2. 5)

방법 1) Deparaffinize tissue in distilled water. 2) Treat in HID solution at room temperature for 18~24 hours. 3) Rinse in running tap water. 4) Stain in Alcian blue solution（p. H 2. 5）for 5 minutes. 5) Briefly wash with water. (If necessary, counterstain nuclei to fix the red color. ) 6) Dehydrate, clear and mount with mounting media by following routine procedure.

• Sulfated mucins ----- Purple to Dark brown • Carboxylated Mucins ------ Blue • Nuclei -------------- Red (Counterstain nuclei to fix the red color) 시알로뮤신분비 술잔세포는 밝은 청색 설포뮤신분비 술잔세포는 흑청색