Bioqumica industrial experimental 5930147 Valeria Reginatto Spiller Bioqumica

Bioquímica industrial experimental 5930147 Valeria Reginatto Spiller

Bioquímica industrial experimental • Objetivos – Geral: Introduzir os alunos em trabalhos de laboratório com enfoque em biotecnologia. – Específico: Aplicar conceitos básicos de microbiologia, biologia molecular e bioquímica em fermentações microbianas e na caracterização de produtos de metabolismo microbiano.

Bioquímica industrial experimental PROGRAMA - Noções de biosegurança. - Técnicas de isolamento e manutenção de microorganismos. - Caracterização de microorganismos. - Produção e quantificação de enzimas - Métodos de quantificação de microrganismos - Cinética de crescimento microbiano - Técnicas de biologia molecular - Transformação bacteriana/complementação metabólica.

Bioquímica industrial experimental • Avaliação • Nota 1: média dos relatórios (peso 4) • Nota 2: média das provas (peso 3) – 2 provas sobre a teoria das práticas • Nota 3: Projeto (peso 3) • Presença • Não compareceu em aula prática, não poderá apresentar relatório (nota = 0) • Somente poderá justificar com atestado médico ou certificados de apresentação de trabalho em congresso.

Bioquímica industrial experimental • Aulas práticas: – 13 alunos: 6 grupos • 5 grupos de 2 alunos e 1 grupo de 3; – Faltas: não poderá ser apresentado o relatório pelo aluno que faltou no grupo • Relatórios: – Avaliação do relatório terá 3 partes

Relatórios • Professora: postar a aula, na semana da aula antes – (portal ou e-disciplinas) • Alunos – Relatório em 3 etapas: • 1) Antes da aula: (e-disciplinas ou google classroom) (25%) – Ler o protocolo e explicar o que vai estudar no dia. – Será feita arquicao oral, durante a aula prática • 2) Ao final da aula prática: (25%) – Entregar os resultados “brutos” (absorbância, cálculo de diluições, número de contagem de células) ESCREVER A MÃO!!!! • 3) Na semana após a aula: (50%) – – Entregar introdução (importância do experimento), metodologia (com suas palavras (sucinto), sem copiar do protocolo), resultados e a discussão, questões sugeridas ao final dos protocolos. Entrega e possibilidade de melhora

PROJETO CERVEJA (4 pontos na média) – 1 grupo de 6 alunos e 1 grupo de 5 alunos • Pré-projeto (1, 0) • Execução (1, 0) • Protocolo experimental (1, 0) Pré projeto (1, 0 ponto) 01/04 Etapa de organização. Listar todos os materiais necessários para a aula de cerveja (vidraria, ingredientes com quantidades, equipamentos), esquema de protocolo experimental, métodos de monitoramento e de acompanhamento da fermentação (célula viável de levedura, contaminação, brix, álcool), cronograma. Quanto tempo de fermentação? Execução do Projeto (1, 0 ponto) 29/05 -18/06 No laboratório de ensino, com a presença do professor, será cobrada a presença de todos os integrantes do grupo. Apresentação oral dos resultados e entrega do protocolo experimental (1, 0 pontos) 18/06 Relatório final com a descrição da metodologias e resultados das etapas realizadas em laboratório (computador). Escrita de protocolo, nos moldes da disciplina (computador). Apresentação oral apresentação de resultados, discussão (dificuldades) e sugestões.

• Cronograma 2020

Normas de biosegurança • • • • RECOMENDAÇÕES GERAIS O local de trabalho deve ser mantido sempre em ordem Nunca pipete com a boca, nem mesmo água destilada. Use dispositivos de pipetagem mecânica. Não coma, beba, fume, masque chiclete ou beba. Evite o hábito de levar as mãos à boca, nariz, olhos, rosto ou cabelo, no laboratório. Lave as mãos antes de iniciar o trabalho e após a manipulação de agentes químicos, material infeccioso, mesmo que tenha usado luvas de proteção, bem como antes de deixar o laboratório. Utilize jalecos ou outro tipo de uniforme protetor, de algodão, apenas dentro do laboratório. Não utilize essa roupa fora do laboratório. Não devem ser utilizadas sandálias ou sapatos abertos no laboratório. Utilize luvas. Não devem ser usados jóias ou outros adornos nas mãos, porque podem impedir uma boa limpeza das mesmas. Mantenha a porta do laboratório fechada. Utilize dispositivos de contenção ou minimize as atividades produtoras de aerossóis, tais como operações com grandes volumes de culturas ou soluções concentradas. Essas atividades incluem: centrifugação (utilize sempre copos de segurança), misturadores tipo Vortex (use tubos com tampa), homogeneizadores (use homogeneizadores de segurança com copo metálico), sonicagem, trituração, recipientes abertos de material infeccioso, frascos contendo culturas, inoculação de animais, culturas de material infeccioso e manejo de animais. Qualquer pessoa com corte recente, com lesão na pele ou com ferida aberta (mesmo uma extração de dente), devem abster-se de trabalhar com patógenos humanos. Coloque as cabines de segurança biológica em áreas de pouco trânsito no laboratório, minimize as atividades que provoquem turbulência de ar dentro ou nas proximidades da cabine. Descontamine todas as superfícies de trabalho diariamente e quando houver respingos ou derramamentos. Observe o processo de desinfecção específico para escolha e utilização do agente

Normas de biosegurança • • Coloque todo o material com contaminação biológica em recipientes com tampa antes de removê-los do laboratório para autoclavação. Descontamine por autoclavação ou por desinfecção química, todo o material com contaminação biológica, como: vidraria, caixas de animais, equipamentos de laboratório, etc. . . , seguindo as recomendações para descarte desses materiais. • • ·Descontamine todo equipamento antes de qualquer serviço de manutenção. · Seringas com agulhas ao serem descartadas devem ser depositadas em recipientes rígidos, a prova de vazamento e embalados como lixo patológico. • Vidraria quebrada e pipetas descartáveis, após descontaminação, devem ser colocadas em caixa com paredes rígidas rotulada “vidro quebrado” e descartada como lixo geral. • Saiba a localização do mais próximo lava olhos, chuveiro de segurança e extintor de incêndio. Saiba como usá-los. • Mantenha preso em local seguro todos os cilindros de gás, fora da área do laboratório e longe do fogo. · • Qualquer acidente deve ser imediatamente comunicado à chefia do laboratório,

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Prática 1 1)Preparo de Material Microbiológico – Preparar meios de cultura e materiais – Esterilizar em autoclave

Prática 1 • Preparo meio de cultura LB para 1 Litro Preparar apenas 100 m. L – 5 g/L de extrato de levedura – 10 g/L de triptona – 10 g/L de Na. Cl – Acertar o p. H em 7, 0 com HCl ou Na. OH e completar o volume para 1000 m. L • Preparar *2 m. L de leite em pó 11 % em tubo de ensaio Antes de autoclavar, preparar os materiais conforme abaixo: o Os meios contidos nos erlens acima devem ser tampados com algodão e papel alumínio. o O leite em pó deve ser tampado com algodão e papel alumínio o Embrulhar 1 bastão de vidro em papel pardo o Tubo falcon de 15 m. L contendo esferas de vidro até o volume de 4 m. L. Tampar com algodão e papel alumínio

• Cada grupo Prática 1 • 100 m. L de meio LB líquido 2) 25 m. L de meio LB sólido ( 2 % ágar ) Meio LB em erlen de 250 m. L dividir em 3 partes 1) Meio LB líquido (sem ágar) permanece no erlem de boca larga (25 m. L), onde vai ser colocada a amostra 3) 25 m. L de meio LB sólido + amido (2% ágar e 1 % amido) 4) 25 m. L de meio LB sólido + leite (2, 2% ágar e *2 m. L leite em pó 11% (m/v) Tampar e colocar para esterilizar • Preparar *2 m. L de leite em pó 11 % em tubo de ensaio