Beredskab i forbindelse med stikprvekontrol og fund af

Beredskab i forbindelse med stikprøvekontrol og fund af Ringbakteriose Charlotte Thrane Plantedirektoratet

INDHOLD • Kartoffelprøvens gang i laboratoriet – Overvågning (survey) – Suspekte prøver og positive fund • EU-ændringer • Analyser af kartoffelprøver i næste sæson?

Rystning af navleender

EDB-registrering af prøven

Opkoncentrering af prøven

Gemmeprøver • Halvdelen af prøven anvendes til den indledende undersøgelse • Der opbevares to prøver i fryser: – Evt. ægplantetest – Referencemateriale • Der gemmes yderligere kartoffelrystevand i fryser

IFmikroskopi

IF-test • Polyklonalt antistof • Monoklonalt antistof • Stærkt lysende • Stor sandsynlighed for at finde Ringbakteriosebakterier • En risiko for falsk positive bakterier • Der findes pt. kun ét på markedet og det er af relativt dårlig kvalitet • Nogen risiko for falsk negative resultater • Lav risiko for falsk positive resultater

Kontrolløren udtager kartoffelprøven hos avler Prøven modtages i Plantedirektoratets laboratorium Udvinding og opkoncentrering af kartoffelekstrakt fra navleender fra kartoffelprøven negativ IF-test suspekt Brev tilgår avler fra Sektor for Planter og Plantesundhed vedr. mistanke om fund af Ringbakteriose suspekt Alternative hurtigmetoder negativ PCR IF (alternativ) suspekt Ægplantetest og identifikation af renkultur positiv Analysebevis og restriktionsbrev fremsendes af Sektor for Planter og Plantesundhed negativ Analysebevis tilgår avler fra Plantedirektoratets laboratorium

PCR DNA-fingeraftryk

Ægplante test

Ringbakteriose bakterier IF-test

Akkrediteret analyse • DANAK • Officiel analysemetode • Kvalitetsstandard – Oplæring af personale – Forsøgsprotokoller – Dokumentation – Afvigelser – Ringtests

Ændringer i EU-direktivet for Kontrol af Ringbakteriose (Forventede ændringer!) • Forsigtighed fra EU-kommisionens side • Kun annekser berørt af ændringsforslag

Testmetoder • Nye metoder • Mere ensartede detektionsgrænser metoderne imellem • Definering af krav til analysens kvalitet • Mindst 2 forskellige laboratorieundersøgelser skal være positive før en prøve må anses som suspekt • Ægplantetesten forbliver • Knoldene skal gemmes indtil analysen er afsluttet

Sammenligning af detektionsgrænser ved forskellige analysemetoder Test/prøve IF ELISA Ægplantetest 1 2 3 4 5 6 7 8 + + + + - - nt* nt + + + PCR-Pastrick nt nt +/+ +/+ Tabel 1 Oversigt over de testede metoders følsomhed. Et plus (+) markerer at der ved metoden har kunnet påvises Cms. * nt=ikke testet.

Biologisk forskellige principper Analyse IF Biologisk princip Serologisk test (antistof) Genkendelse af bakteriens overfladestruktur DNA-baseret PCR (”genetisk fingeraftryk”) FISH (Mikroskopi) Ægplante Patogenitet Genkendelse af særegent genetisk arvemateriale Kan bakterien fremkalde karakteristiske symptomer på planten?

Overskæring af knolden Visuel undersøgelse for symptomer

1. screeningstest IF eller PCR Brev tilgår avler fra Sektor fra Planter og Plantesundhed vedr. mistanke om fund af Ringbakteriose negativ suspekt 2. screeningstest IF eller PCR negativ suspekt Ægplantetest suspekt Renkultur identificeres positiv Analysebevis og restriktionsbrev fremsendes af Sektor for Planter og Plantesundhed negativ Analysebevis tilgår avler fra Plantedirektoratets laboratorium