Bank Komrek Eukariotycznych Transfer Technologii do Centrum Bio

Bank Komórek Eukariotycznych Transfer Technologii do Centrum Bio. Mo. Bi. L 25 -29 / 10 / 2004 Konrad Kleszczyński Jolanta Grzenkowicz – Wydra

Skąd ? ADVANCELL • biotechnologiczna firma wdrożeniowa wykonująca usługi dla przemysłu w oparciu o ludzkie linie komórkowe (toksykologia, onkologia, dermatologia, choroby degeneracyjne mózgu) • bankowanie komórek (156 linii) • tworzenie i namnażanie nowych linii dla potrzeb lokalnego środowiska naukowego i ich dystrybucja • kontrola jakości otrzymywanych linii komórkowych

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości Sprzęt niezbędny do pracowni komórkowej: • komora laminarna klasy II • inkubator CO 2 • mikroskop świetlny z odwróconą optyką • lodówka oraz zamrażarki: - 20 ÷ -30 OC - 80 OC • system oczyszczania wody • wirówki • inny sprzęt

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości Sprzęt niezbędny do przechowywania komórek (zbiornik Dewara): • zbiornik na ciekły azot (3600 ampułek o pojemności 2 ml, poj. zbiornika 116 L, parowanie 0, 6 L / dobę) • zbiornik magazynowy na ciekły azot (poj. zbiornika 34 L, parowanie 0, 25 L / dobę)

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości Standardowe Procedury Operacyjne Standard Operating Procedures Zbiór szczegółowych instrukcji zapewniających jakość i spójność postępowania z komórkami. SOP obejmują: • pobranie i przechowywanie próbek • aparatura: obsługa, sprawdzenie działania, kalibracja • odczynniki: potwierdzenie odbioru, oznakowanie, przepisy wykonania roztworu • monitorowanie i rejestrowanie wszystkich czynności laboratoryjnych

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości • bazy danych służą do organizacji i zarządzania przechowywanymi próbkami • pełen dostęp do bazy danych ma administrator, który wskazuje miejsce złożenia bądź pobrania próbki • dostęp pracownika do bazy danych ogranicza się do wypełnienia formularza określonego przez SOP dostępnego w lokalnej sieci • codziennie wszystkie operacje są archiwizowane

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości Usługi oferowane przez Bank Linii Komórkowych • Udostępnianie i sprzedaż linii komórkowych • Bezpieczny depozyt, krótko- i długoterminowy • Identyfikacja i kontrola jakości linii komórkowych • Usuwanie zanieczyszczeń Mycoplasma z hodowli komórkowej

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości Przechowywanie linii komórkowych oraz ich dystrybucja Original Bank (OB) do 5 krioampułek Master Bank (MB) 10 - 15 krioampułek Distribution Bank (DB) 15 - 30 krioampułek 106 komórek / ml

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości • Do podstawowych testów kontroli jakości należą: test immunocytochemiczny, test na obecność bakterii i test na obecność Mycoplasmy • Metoda detekcji mykoplazmy oparta jest na amplifikacji PCR z użyciem komercyjnego zestawu • Większość zanieczyszczeń hodowli komórkowych spowodowana jest przez następujące gatunki: M. arginini, M. fermentans, M. hyorhinis, M. orale, Acholeplasma laidlawii • Zanieczyszczoną hodowlę traktuje się antybiotykami będącymi pochodnymi tetracykliny (minocyklina, BM-cyklina) lub ciprofloksacyną

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości C+ C- M 1 2 3 4 5 6 7 Elektroforeza w 2% żelu agarozowym produktów amplifikacji DNA C+ kontrola pozytywna C- kontrola negatywna M wzorzec masowy DNA 1 -7 badane próbki hodowla zainfekowana zdrowa hodowla Mycoplasmą Barwienie wykonane wg Hoechst 33258

Pracownia SOP Bazy danych Bankowanie Kontrola Jakości