Az orvosi biotechnolgiai mesterkpzs megfeleltetse az Eurpai Uni
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011
Az orvosi biotechnológiai mesterképzés megfeleltetése az Európai Unió új társadalmi kihívásainak a Pécsi Tudományegyetemen és a Debreceni Egyetemen Azonosító szám: TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Csősz Éva Molekuláris terápiák – 7. előadás REKOMBINÁNS ANTITESTEK ÉS A PHAGE DISPLAY TECHNIKA
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 A 7. fejezet célja, hogy bemutassa a terápiák során felhasznált antitestek termelésének lehetőségeit és korlátait. A fejezet során bemutatásra kerül az antitestek termelődésének folyamata, a terápiás antitestek termelése hibridómákban illetve a nagyfokú antitest diverzitás biztosítása fág diszplay segítségével. A 7. fejezet témakörei 7. 1. Áttekintés 7. 1. 1. Az antitestek szerkezete és termelődése a szervezetben 7. 1. 2. Antigén – antitest kölcsönhatás 7. 2. A terápiás antitestek termelése 7. 2. 1. Antitestek termelése hibridómákban 7. 2. Humanizált antitestek 7. 2. 3. Humán antitestek termelése 7. 3. Antitestek termelése fág diszplay segítségével 7. 3. 1. A fág diszplay technika bemutatása 7. 3. 2. Fág könyvtárak készítése 7. 4. A terápiás antitestek alkalmazása
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Az antitestek szerkezete Szupervariábilis régió NH 3+ VH VH VL NH 3+ VL CH 1 CL COO- Könnyű lánc: CLkonstans régió, variábilis régió COOHinge régió CH 2 Nehéz lánc: konstans régió, variábilis régió Diszulfid hidak Fab régió CH 3 COO- Fc régió
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Az antitestek nehéz láncának szerkezete kb. 85 gén kb. 27 gén VH 1 VH 2 VH 3 VH 4 VHn DH 1 DHn kb. 6 gén JH 1 JH 2 JH 3 JHn Nehéz lánc VH 4 DH 1 JH 2 C Ig. G Cµ C C C C α
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Az antitestek könnyű láncának szerkezete kb. 35 kappa gén kb. 5 kappa gén VL 1 VL 2 VL 3 VL 4 VLn JL 1 JL 2 JL 3 JLn kb. 30 lambda gén kb. 4 lambda gén VL 2 JL 3 C C kappa könnyű lánc
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Az antitestek termelése a B sejtekben B sejt Antitest
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 A klonális szelekció és klonális expanzió Y Rekombináció Kapcsolódási diverzitás Szomatikus hipermutáció Y YY B sejt BCR Klonális szelekció Antigén/epitóp B sejt Klonális expanzió Plazma sejt Specifikus antitest
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Poliklonális antitestek Y Y B sejt Antitest Antigén Antitest B sejt Y Epitóp
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Monoklonális antitestek B sejt Antitest Antigén Epitóp
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Antitestek termelése hibridómákban Antigén Mielóma sejtek HGPRT Antitest termelés Egér immunizálása Lépsejtek izolálása HGPRT Antitest termelés Lépsejtek és mielóma sejtek fúziója, a hibridóma sejtek létrehozása Hibridómák szűrése és szaporítása Y Y Y Y Antitestek izolálása
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Humanizált antitestek Humán antitest Egér antitest Humanizált antitest / kiméra antitest
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Humán antitestek termelése génmódosított egerekben Egér immunoglobulin gén Humán vagy humanizált antitestek termelése
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Az M 13 bakteriofág szerkezete M 13 bakteriofág 5 db p 6 DNS - 6. 4 kb 5 db p 9 5 db p 7 2700 db p 8 900 nm 5 db p 3 F-pilus E. coli
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Az immobilizált fehérjékhez kötött fágok specifikus elúciója Specifikus elúció Immobilizált fehérje / affinitás mátrix
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Enzim fág diszplay mátrix
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Szubsztrát fág diszplay I. mátrix
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Szubsztrát fág diszplay II. mátrix
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Enzim-szubsztrát fág diszplay I. mátrix
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Enzim-szubsztrát fág diszplay II. mátrix
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Fág könyvtárak készítése Változatos szekvenciák sokasága Fágmid Rekombináns fágmid
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Proteáz szubsztrát fág könyvtár készítése Változatos szekvenciák létrehozása Proteáz szubsztrát szekvencia h. GH gén Proteáz szubsztrát M 13 g. III gén Fágmid vektor Fág könyvtár M 13 g. III gén
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Szubsztrát fág diszplay – proteáz hasítóhelyek fejlesztése Proteáz érzékeny szekvenciák Proteáz h. GH receptor Proteáz Alacsony p. H mátrix Proteáz rezisztens szekvenciák Szekvenálás
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 In vivo fág diszplay – ér endothel sejtek térképezése A fágok az erek falán expresszált fehérjékhez kötődnek Biopszia Fág könyvtár beadása intravénásan A kötődött fágok lemosása A fágok által hordozott peptidek/fehérjék azonosítása A kötődött fágok szaporítása
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Antitest könyvtárak készítése teljes vérből Teljes vér (Immunizált donor) Antitest gének Limfociták Antitest specifikus primer Fágmid m. RNS E. coli sejtek c. DNS 108 különböző antitest génjét tartalmazzák
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Y Y YY Antitest függő citotoxicitás mechanizmusa Y YY Tumor ellenes antitestek Fc receptor Tumor sejt Ölő sejt (NK sejt vagy monocita)
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 Immunszupresszáns hatású terápiás antitestek alkalmazása Monoklonális antitestek • Adalimumab • Infliximab • Golimumab • Cetrolizumab pegol Basiliximab Humán-egér kiméra antitest TNFalfa IL 2 receptor alfa lánc • Pszoriázis • Reumatoid arthritisz • Crohn betegség • Spondilitisz Transzplantáció utáni szervkilökődés megakadályozására, főként veseátültetések esetén
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 A terápiás antitestek változatai Bispecifikus antitest (kb. 300 k. Da) Ig. G - sc. Fv (Fab – sc. Fv)2
TÁMOP-4. 1. 2 -08/1/A-2009 -0011 A kisméretű terápiás antitestek változatai Fab sc. Fv F(ab’)2 Tandem sc. Fv Diabody S-S Fv S-S ds. Fv Nanobody sc. Fv 2 Triabody Bispecifikus antitest
- Slides: 29