Aspectos tcnicos del diagnstico de VIH David Dalmau

Aspectos técnicos del diagnóstico de VIH David Dalmau* y Piedad Arazo** * Hospital Mutua Terrassa. Barcelona ** Hospital Miguel Servet. Zaragoza

Contenido v Métodos indirectos o serológicos v Métodos directos o virológicos v Pruebas de detección rápida v Pruebas de cribado o screening y pruebas de confirmación v Período ventana

CICLO DE REPLICACIÓN DEL VIH

VIH-1. DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA

Historia natural del VIH y cinética de sus marcadores MOLECULAR BIOLOGY OF HIV Plasma HIV RNA p 24 antigen Dias Meses DNA PCR RNA PCR p 24 Ag Anti-HIV * from ANAES Report January 2000 Anti-HIV Ab Años después infección VIH 8 -17 días* 12 -26 días* 20 -45 días*

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos directos § Cultivo viral § Antigenemia p 24 § Detección de ácidos nucléicos v Métodos indirectos § Pruebas de detección o cribado ü Pruebas de detección rápida § Pruebas de confirmación

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos directos § Cultivo viral o Procedimiento complejo con sensibilidad muy variable en los distintos estadios de la infección y en distintos laboratorios. § Antigenemia p 24 o Detección del antígeno p 24 del virus.

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos directos § Detección de ácidos nucléicos o Detección de material genético del virus mediante amplificación por PCR o Carga viral plasmática: cantidad de ARN del virus por m. L de plasma. o Las técnicas ultrasensibles pueden llegar a detectar hasta 25 -40 copias/m. L.

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos directos § Detección de ácidos nucléicos o Indicaciones de uso: ü Monitorización del tratamiento antirretroviral ü Predicción de la progresión ü Valoración del riesgo de transmisión ü Diagnóstico de la infección aguda

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos indirectos Detectan la respuesta inmunitaria (humoral o celular) del huésped, bien mediante la detección de anticuerpos específicos del virus o bien mediante la investigación de la inmunidad celular

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos indirectos § Pruebas de detección o cribado ü Son las que primero se realizan y sirven para descartar los resultados negativos ü Precisan confirmación aquellas que han sido positivas ü El enzimoinmunoensayo (EIA) es el método más utilizado como método de cribado

VIH-1. Diagnóstico indirectos

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos indirectos § Pruebas de detección o cribado ü EIA 3ª generación detecta todas las subclases de anticuerpos y no sólo las Ig. G �mayor sensibilidad para reconocer la primoinfección (Ig. M) y para el diagnóstico de la infección pediátrica (Ig. M e Ig. A). ü EIA 4ª generación detecta al mismo tiempo al antígeno p 24 y a los Ac frente al VIH �acortamiento del período ventana.

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos indirectos § Pruebas de detección o cribado PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA ü Emplean antígenos similares a los EIA ü Obtención del resultado entre 1 y 20 minutos ü Algunas pueden hacerse en saliva o en sangre completa ü Sensibilidad comparable a las técnicas de cribado, especificidad algo menor ü Inconveniente: LECTURA SUBJETIVA

VIH-1. Diagnóstico indirectos PRUEBAS RÁPIDAS

Procedimiento de la prueba instantánea INSTITM (IV)

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA Para ser ideal debería reunir los siguientes criterios: § Alta sensibilidad y especificidad (>99%) § Ser reproducible § Ser fácil de aprender, realizar e interpretar § Ser precisa § Ser de fácil almacenamiento § No requerir equipamiento adicional § No tener carácter invasivo

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA Resultado negativo Resultado reactivo Resultado indeterminado Negativo definitivo (salvo periodo ventana) Debe confirmarse mediante EIA o Western Blot Repetir la prueba en un mes

VIH-1. Diagnóstico Pruebas de Detección. EIA Causas de Falsos Positivos Relativas al Suero • • • Congelación-descongelación Almacenamiento a tª subóptima Aspecto lipídico, turbio o hemolizado Contaminación microbiana Tratamiento con calor >60ºC Error de extracción o identifiación indirectos

VIH-1. Diagnóstico indirectos Pruebas de Detección. EIA Causas de Falsos Positivos Relativas a la Presencia de Autoanticuerpos • • Anticuerpos anti-HLA-DR 4, DQw 3 Enfermedades reumatoideas Polimiositis Lupus eritematoso Multitrasfundidos Trasplantados renales Multíparas

VIH-1. Diagnóstico Pruebas de Detección. EIA Causas de Falsos Positivos Relativas a Otras Condiciones • • • Hemodializados Sd. Stevens-Johnson Administración previa de inmunoglob Vacunación previa (gripe, hepatitis B) Enf. Hepática alcohólica grave Cadáver indirectos

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos indirectos § Pruebas de confirmación: Western Blot § Es la más utilizada § Es altamente específica (1/20. 000 falsos positivos y 1/250. 000 falsos negativos) § Puede dar tres tipos de resultados

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH v Métodos indirectos § Pruebas de confirmación: Western Blot § Positivo: presencia de ciertas bandas § Negativo: ninguna banda presenta reacción § Indeterminado: ni positivo, ni negativo

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH [ Un resultado indeterminado en el Western Blot del VIH-1 suele corresponder, por lo menos, a siete situaciones distintas: § Infección por el VIH-2. § Durante el proceso de seroconversión por el VIH-1. § Enfermedad avanzada. § Niños nacidos de madres seropositivas. § Individuos africanos (divergencia genética de las cepas). § Reactividad inespecífica o cruzada con otros anticuerpos. § Individuos tratados con antirretrovirales con cargas virales indetectables.

Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH [ Si aparece un resultado indeterminado en el Western Blot: § Interrogar sobre potenciales fuentes de exposición recientes al VIH § Repetir EIA y Western Blot a los 3 -6 meses § Realizar pruebas específicas para VIH-2 en suero inicial más pruebas suplementarias (PCR) para el VIH-1

VIH-1. Diagnóstico Pruebas de Confirmación Line Immune Assay (LIA) Western Blot (WB) indirectos

VIH-1. Diagnóstico indirectos

Características operacionales de las pruebas de detección de Ac frente al VIH [ Sensibilidad: Es la probabilidad de que para un sujeto enfermo se obtenga en la prueba un resultado positivo. [ Especificidad: Es la probabilidad de que para un sujeto sano se obtenga un resultado negativo. [ Valor predictivo positivo: Es la probabilidad de padecer la enfermedad si se obtiene un resultado positivo en el test. [ Valor predictivo negativo: Es la probabilidad de que un sujeto con un resultado negativo en la prueba esté realmente sano.

VIH-1. Diagnóstico Sensibilidad (>98%) Especificidad (98%) v Valor Predictivo Positivo v Valor Predictivo Negativo > Prevalencia > VPP y < VPN < Prevalencia < VPP y > VPN

VIH-1. Diagnóstico Primoinfección Seguimiento. Acs. Basal – 3 meses – 6 meses § § CV > 10. 000 copias RNA-VIH-1/ml plasma Falsos (+) (4%) / Falsos (-) (var. Genética) Anticuerpos negativos o débilmente positivos Western Blot negativo o indeterminado RNA-VIH-1 NO ES DIAGNÓSTICO

VIH-1. Diagnóstico Pruebas de Confirmación. Western Blot Criterios de Positividad OMS. 2 gp: gp 160, gp 120, gp 41 CRA. 1 de cada gen estructural (env, pol y gag) FAD. P 24 + p 32 + (gp 41 o gp 120 o gp 160) CRSS. P 24 + (gp 41 o gp 120 o gp 160) o p 32 + (gp 41 o gp 120 o gp 160) CDC. P 24 + (gp 41 o gp 120 o gp 160) o gp 41 + (gp 120 o gp 160) indirectos

VIH-1. Diagnóstico indirectos