Aseguramiento de calidad PERSONAL INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALES

Aseguramiento de calidad PERSONAL INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALES Norma ISO 17025 Bqca. QM Alicia I. Cuesta, Consultora Internacional de la FAO

Objetivos de la clase: 1. PERSONAL: üPerfil del puesto de trabajo üPersonal autorizado üCompetencia del personal üCapacitación del personal 2. INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALES: üMedidas para prevenir la contaminación cruzada. üPlan de limpieza y desinfección. üPlan de higiene. üMonitoreo ambiental: metodología.

Ensayo Microbiológico FLas operaciones que se realizan dentro del laboratorio de microbiología pueden dividirse en aquellas que son críticas para la calidad de resultados del ensayo y aquellas que tienen un menor impacto. FLas operaciones críticas deben ser: controladas, monitoreadas y documentadas.

Las personas son el motor de los sistemas de calidad y por lo tanto este es un punto crítico y que la norma ISO/IEC 17025 lo trata extensamente. Tiene que haber motivación interna para planificar, implementar y mantener el sistema de calidad!!

Perfil del puesto de trabajo: Definición: Son los requisitos mínimos de formación académica y experiencia que debe tener el personal para acceder al puesto de trabajo. üLa dirección debe: Definir y mantener actualizados los perfiles de puestos del personal directivo, técnico y de apoyo clave afectado a los ensayos.

¿ Qué perfiles del puesto de trabajo se deben elaborar? ü ü Director del laboratorio. Responsable de calidad. Jefe del laboratorio de microbiología. Personal técnico del laboratorio de microbiología. ü Auxiliar de laboratorio de microbiología.

Competencia del personal La competencia involucra conocimientos, habilidades, comprensión y actitudes. La competencia del personal debe ser evaluada en forma continua. Ejemplo: a través de aseguramiento de la calidad de los resultados como ser: Ensayos Intralaboratorios e Interlaboratorios

Personal autorizado: ☼ Definición: personal que posee el reconocimiento formal de su capacidad para realizar en forma correcta una determinada tarea que se le ha sido asignada. ☼ El laboratorio debe tener documentado el personal autorizado para cada ensayo.

CAPACITACIÓN DEL PERSONAL ☺ Entrenamiento: Actividad de enseñar las habilidades que una persona necesita para desarrollar su labor en un determinado puesto de trabajo. Tiene carácter eminentemente práctico. Se relaciona directamente con la tecnología, útiles, equipos, etc. que se usan en el puesto de trabajo. ☺ Formación: Actividades de incorporación de conocimientos generales y específicos necesarios para que el personal pueda desarrollar su labor en un determinado puesto de trabajo. Se hace referencia a la formación académica del personal.

CAPACITACIÓN DEL PERSONAL FTodo el personal técnico que trabaja en el laboratorio de microbiología debe recibir un adecuado entrenamiento de modo de asegurar que ejecuta en forma idónea las operaciones relacionadas con el ensayo. FCuando el laboratorio emplea personal en formación debe proveer adecuada supervisión

CAPACITACIÓN DEL PERSONAL Definición: proceso continuo y sistemático destinado a la formación, entrenamiento, actualización o perfeccionamiento específico del personal. La capacitación es un requisito muy importante del sistema de calidad.

Requisitos: Capacitación del personal F Se debe realizar periódicamente un estudio de las necesidades de capacitación y entrenamiento. FPlanificación: El laboratorio debe contar con un programa de capacitación documentado que se confecciona en forma periódica. FLa formación permanente de su personal. FLa formación a ser adquirida deberá orientarse a garantizar la competencia en las técnicas y métodos realizado por el personal involucrado en el ensayo.

Requisitos: Capacitación del personal El laboratorio debe asegurar : FLa capacitación que recibe el personal, dentro de la organización o fuera de ella, debe incluir temas relacionados con calidad de modo de asegurar el buen funcionamiento de su sistema de calidad y la mejora continua. FEl personal cuenta conocimientos, experiencia y competencia de acuerdo a las tareas y responsabilidades que tenga asignadas.

PROCEDIMIENTO: PLAN DE FORMACIÓN Y ENTRENAMIENTO PERSONAL DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA F Nombre y apellido del empleado. F Periodo previsto para realizar la capacitación F Puesto del empleado. F Fecha inicio capacitación  Actividades de capacitación a realizar. F Fecha aceptado competente. F Criterio de aceptación de la capacitación F Responsable de capacitación. F Referencia a la evidencia objetiva

PLAN DE FORMACIÓN Y ENTRENAMIENTO PERSONAL DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA El laboratorio debe establecer y documentar: F El intervalo de tiempo límite que el analista está habilitado para realizar el ensayo sin necesidad de recapacitarse.

Capacitación del personal LABORATORIO MICROBIOLOGIA Todo el personal técnico debe recibir un adecuado entrenamiento que incluyen:  Técnicas básicas de microbiología para la manipulación de cultivos y muestras en condiciones de esterilidad Adecuado criterio para el manejo de material potencialmente infeccioso. Conocimiento de normas de bioseguridad, etc.

Organización FEl laboratorio debe definir claramente en su manual de calidad las responsabilidades de todo el personal. FEl personal debe tener claro conocimiento del área de su responsabilidad.

La organización debe establecer quién (RESPONSABILIDADES): • Identifica las necesidades de capacitación • Confecciona el plan de capacitación • Aprueba el plan de capacitación • Capacita a los nuevos empleados • Realiza el seguimiento del Plan de capacitación anual • Completa la documentación de capacitación • Completa y/o archiva la documentación, Curriculum vitae y certificados de capacitación. • Evalúa la eficiencia de la capacitación realizada • Asigna de recursos para llevar a cabo la capacitación.

REGISTROS: El laboratorio debe elaborar, conservar registros actualizar: üDe la autorización del personal, incluye la fecha a partir de la cual se lo autorizó para efectuar una tarea. üCurriculum vitae y los registros de formación que recibe cada uno de los miembros del personal. üCapacitación en la realización de la tarea asignada. üRelativos a la competencia del personal.

Requisitos Norma ISO 17025: PERSONAL COMPETENCIA TECNICA Descripción de actividades y responsabilidades del personal Calificación básica CONDUCCIÓN TÉCNICO DE APOYO Relación de dependencia CAPACITACION: FIdentificación de las necesidades de formación FPlanificación de la formación. FRealización de la formación FDocumentación. LABORATORIO

INSTALACIONES Y CONDICIONES AMBIENTALES

Instalaciones Las instalaciones del laboratorio de ensayo (incluye fuente de energía, luz y condiciones ambientales) deben ser capaces de facilitar la realización correcta de los ensayos.

Instalaciones (cont) FDebe haber una efectiva separación entre áreas vecinas en las que se realizan actividades incompatibles. FSe deben tomar medidas para prevenir la contaminación cruzada. La ubicación, el diseño y la distribución de las diferentes áreas que integran el laboratorio deben minimizar el riesgo de contaminación de las muestras y los cultivos.

Medidas para prevenir la contaminación cruzada. En la práctica esto se puede lograr: FSeparando las actividades en tiempo y espacio FMediante la construcción del laboratorio según un diseño “sin camino de regreso” se puede obtener una reducción significativa del riesgo de contaminación cruzada. FLlevando a cabo los procedimientos de una manera secuencial, secuencial usando las precauciones apropiadas para asegurar la integridad de la muestra y del ensayo. Por ejemplo uso de recipientes herméticamente cerrados.

Separación de áreas del Laboratorio: No es aceptable que el laboratorio de microbiología ocupe una sola sala polivalente. Requisito: El área analítica debe estar separada de la de preparación de medios de cultivo y lavado de material.

Separación de áreas del Laboratorio: Es conveniente separar las siguientes áreas: F zona de recepción y almacenamiento de muestras. F Preparación, muestreo y pesada de muestras. ( importante si se analizan productos en polvo) F Examen de muestras incluyendo su incubación. F Manipulación de patógenos. F Mantenimiento de microorganismos de referencia. F Verificación de la esterilidad. F Preparación de los medios y equipos incluyendo su esterilización F Descontaminación. El área de Lavado de material ( después de la descontaminación) pueden compartirse con otras partes del laboratorio (precaución contaminación con trazas de sustancias que afecten crecimiento microbiano).

El diseño del laboratorio dependerá de los ensayos que se llevarán a cabo. Ejemplo si además de realizar ensayos por métodos tradicionales se llevan a cabo ensayos empleando técnicas de biología molecular se necesitarán áreas adicionales. El laboratorio debe tomar las medidas necesarias para reducir al mínimo el riesgo de contaminación siempre que dicho riesgo sea importante para el tipo de ensayos realizados

Ejemplo de distribución de áreas LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. Sala de siembra 10. 2 1 Droguero 2 Sala de preparación de muestras Oficina Área de acceso restringido 3 Sala de preparación de material 8 10 Sala de lavado 5 4 6 9 7

Medidas para de disminuir el riesgo de contaminación y facilitar la limpieza y desinfección de las diferentes áreas. Medidas relativas al diseño: FEspacio disponible: Las áreas del laboratorio deben ser suficientemente espaciosas. El espacio necesario estará de acuerdo con el volumen de muestras analizadas y la organización interna del laboratorio. FFacilitar la limpieza: Las uniones entresuelo, paredes y techos deben ser cóncavas. Contar con canillas, adecuadamente ubicadas, para el lavado de manos del personal. FVentilación: Las áreas de trabajo deben estar apropiadamente ventiladas y a una temperatura adecuada. Puede hacerse por ventilación natural o forzada, o mediante el uso de acondicionadores de aire. En este último caso, los filtros deben revisarse, mantenerse y reemplazarse periódicamente, acorde al tipo de trabajo que se realiza. FOtros: Evitar uso de cortinas y/o persiana internas En caso de uso incluirlas en el plan de limpieza

Medidas para de disminuir el riesgo de contaminación y facilitar la limpieza y desinfección de las diferentes áreas. Medidas relativas a los materiales : Facilitar la limpieza: FLas paredes, techos suelos y superficies de trabajo del laboratorio deben ser lisas. FLas superficies de madera de las instalaciones y accesorios deben estar protegidas y selladas. Evitar maderas rugosas y sin revestir.

Medidas para de disminuir el riesgo de contaminación y facilitar la limpieza y desinfección de las diferentes áreas. Otras medidas : F Ausencia de documentos obsoletos, objetos o mobiliario innecesario en el área del laboratorio. F Minimizar la apertura de puertas y ventanas durante la realización del ensayo. F Contar para el lavado de manos del personal con canillas no manuales, el jabón desinfectante debe estar dispuesto en dispensadores y toallas descartables para el secado. F Los armario estanterías, equipos deben estar colocados de forma de evitar acumulación de polvo. Ejemplo armarios hasta el techo.

Se debe controlar el acceso y el uso de las áreas que afecta la calidad de los ensayos. El acceso al laboratorio debe estar restringido sólo al personal técnico o a personas autorizadas.

Condiciones Ambientales REQUISITO: El laboratorio debe asegurarse que las condiciones ambientales, bajo las cuales se realizan los ensayos microbiológicos, no invaliden los resultados de ensayo ni comprometan la calidad requerida de los resultados. Cuando los muestreos o ensayos se realicen fuera de la instalación permanente del laboratorio se deben tomar precauciones especiales.

Ejemplos de condiciones ambientales no deseables Condiciones Ambientales Efecto posible sobre el ensayo Lugar a monitorear Deficiente esterilidad biológica Contaminación de las muestras y cultivos Sala de siembra y de preparación de muestras Mayor polvo en suspensión en el aire Contaminación de las muestras y cultivos Sala de siembra y de preparación de muestras

Ejemplos de condiciones ambientales no deseables Condiciones Ambientales Efecto posible sobre el ensayo Suministro eléctrico interrumpido o deficiente -Variación de las condiciones de ensayo. -Pérdida de viabilidad cepas de referencia por descongelación. -Conservación inadecuada de la muestra, reactivos y medios de cultivo. Funcionamiento de estufas, congeladores y heladeras Interfiere en la pesada de la muestra, polvos deshidratados para preparación de medios de cultivos o reactivos Sala de preparación de muestras Niveles de ruido o vibración excesivos. Lugar a monitorear

Requisito El laboratorio debe establecer: Un programa documentado de limpieza, desinfección y desinsectizacion que tenga en cuenta los resultados de vigilancia de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminación cruzada. Los registros de las operaciones de limpieza permiten corroborar el cumplimiento del plan establecido

Procedimiento: PLAN DE LIMPIEZA Y DESINFECCION: Objetivo: üOrganizar las tareas de limpieza y desinfección del laboratorio de microbiología. üEstablecer la frecuencia de realización de las mismas üSe detallan las superficies a limpiar y/o desinfectar, el nivel de limpieza requerido (trapeo húmedo, trapeo mojado, etc. ), los desinfectantes a preparar y su modo de uso. üEl personal que realiza la limpieza. Propósito: para que los locales estén en condiciones adecuadas para realizar los ensayos y permitir al personal que trabaje en forma cómoda.

Procedimiento: PLAN DE HIGIENE. üSon los procedimientos operativos empleados durante la realización del trabajo en el laboratorio. üTiene como principal objetivo evitar la contaminación en todas las etapas del ensayo lo que implicaría obtener resultados erróneos, la infección del personal, etc.

PLAN DE HIGIENE. El laboratorio debe trabajar tomando las siguientes precauciones : ü Relativo al trabajo propiamente dicho. Por ejemplo: • Asegurarse que el área de trabajo esté limpia y que no haya corrientes de aire. • Limpiar la superficie de trabajo con un desinfectante adecuado, antes y después del trabajo. • Durante la siembra y manipuleo estéril de muestras no hablar y evitar toser. • Abrir los tubos de ensayo y botellas cerca de la llama. • Trabajar tan rápido como sea posible, evitando movimientos innecesarios. • la manipulación del material patógeno o tóxico requiere trabajar en áreas cerradas o bajo campanas de flujo laminar, especialmente cuando se abren las cajas de Petri. • Evitar la formación de aerosoles. Se pueden formar al abrir las cajas de Petri, los tubos, las botellas o los frascos, al usar mezcladores, jeringas, centrífugas, etc. y cuando se esterilizan ansas húmedas.

PLAN DE HIGIENE. (cont) El laboratorio debe trabajar tomando las siguientes precauciones : ü Relativo al área de trabajo: • Utilizar vestimenta de uso exclusivo en el laboratorio, guardapolvo de color claro, limpio y en buenas condiciones, no debe ser usado fuera del área de trabajo del laboratorio. • Dejar en zona de oficinas o externa al laboratorio los abrigos. portafolios, etc. Y en el área del laboratorio no comer, beber, fumar. ü Relativo a la Higiene del personal técnico: • Antes y al finalizar la labor en el laboratorio, el personal técnico debe lavarse las manos con un producto adecuado (jabón desinfectante). • El personal debe tener uñas cortas y limpias, el pelo debe estar recogido, no tener anillos ni pulseras. Uso de barbijo si es necesario. • El personal que presente infecciones serias en manos o cara no debe realizar exámenes microbiológicos.

MONITOREO AMBIENTAL: La calidad microbiológica del aire y las superficies del laboratorio en microbiología es un indicador de la efectividad de las tareas realizadas según el: FPlan de limpieza, desinfección y mantenimiento FPlan de higiene.

Procedimiento: MONITOREO AMBIENTAL. Establece : FMetodología para la toma de muestra. F Lugares de toma de muestra. F Límites de tolerancia o criterios de aceptación o rechazo. FFrecuencia de monitoreo. FAcciones correctivas a tomar en caso de desvíos de los límites establecidos. Esto se aplica tanto a control ambiental del área analítica del laboratorio como para la campana de flujo laminar.

El programa de muestreo para monitoreo ambiental puede incluir (dependiendo del ensayo que realiza el laboratorio): • Determinación cuantitativa de microorganismos presentes en el ambiente (recuento total o recuento de determinados tipos de microorganismos como por ejemplo hongos) • Determinación cualitativa de algunos patógenos y/o indicadores dependiendo de los ensayos que realiza el laboratorio (Ejemplo: Enterobacterias, Coliformes, Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Listeria spp, Staphylococcus aureus).

MÉTODOS PARA CONTROL CALIDAD DEL AIRE: Se proponen dos métodos de para el recuento de microorganismos en el aire: üMétodo pasivo, por sedimentación Se realiza el recuento de microorganismos viables que se posan sobre una superficie de medio de cultivo (técnica cualitativa). No existe relación entre la cantidad de colonias encontradas en por placa y el volumen de aire. üMétodo activo, por impacto. Se realiza el recuento de microorganismos viables retenidos sobre una superficie de medio de cultivo forzando un determinado volumen de aire.

Métodos para control calidad del aire: MÉTODO PASIVO Y ACTIVO üLos resultados de ambos métodos no son comparables (el principio de muestreo y las unidades en las cuales se expresan son diferentes). üSE RECOMIENDA INTERPRETAR TENDENCIAS Y NO OBSERVACIONES AISLADAS. (tomar siempre la muestra en un mismo lugar)

Métodos para control calidad del aire: Normas IRAM 14071 -1: 2002 EXPOSICIÓN DE PLACAS: • Toma de muestra: durante un tiempo estipulado, se exponen placas de Petri (o sea se abren las placas) con medio de cultivo no selectivo, en el área de trabajo y durante el proceso de siembra. • Áreas a monitorear o zonas de toma de la muestra: sala de siembra y sala de preparación de muestras. • Medio de cultivo usado. Ejemplo PCA. • Tiempo y temperatura de incubación: Luego de la exposición al aire, las placas se cierran e incuban durante Ejemplo 72 horas a 30 º C. • Frecuencia de realización de los controles. Ejemplo mensual. • Criterio de conformidad: número máximo de colonias por tiempo de exposición de las placas. Ejemplo durante 15 minutos se permite hasta 15 colonias Los resultados se expresan como unidades de colonias (ufc) por placa

Métodos para Control calidad de superficies: ISO 18593 Método Recolección Tipo de superficie Hisopado Hisopo estéril Delimitada Siembra directa Esponjatrapeado Esponja embebida en medio específico Irregular Superficies ≥ 100 cm 2 Siembra de volumen conocido Caja de contacto o Petrifilm Contacto, presión y tiempo standard Plana Incubación directa Siembra

Métodos para control calidad de superficies: POR CONTACTO DIRECTO CON LA SUPERFICIE DE TRABAJO. ü Toma de muestra: por contacto directo con la superficie de ü ü ü trabajo con placa de Petri con medio de cultivo no selectivo. Tiempo y temperatura de incubación: Luego del contacto directo con la superficie de trabajo , las placas se cierran e incuban durante Ejemplo 72 horas a 30 º C. Medio de cultivo usado. Ejemplo PCA. Frecuencia de realización de los controles. Ejemplo trimestrales. ü Áreas a monitorear o zonas de toma de la muestra: sala de siembra y sala de preparación de muestras. ü Criterio de conformidad: Ejemplo ‹ 50 ufc/placa Los resultados se expresan como unidades de colonias (ufc) por placa

Instalaciones y condiciones ambientales Equipamiento necesario Reglas de acceso y utilización de las áreas Limpieza y orden LABORATORIO Plan de higiene Separación de áreas donde se realizan ensayos incompatibles Monitoreo ambiental