ANTBYOGRAM ANTMKROBYAL AKTVTE DZEYNN BELRLENMES Mikroorganizmalar antibiyotiklere kar

ANTİBİYOGRAM

ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE DÜZEYİNİN BELİRLENMESİ ◙ Mikroorganizmalar, antibiyotiklere karşı çok değişik şekilde duyarlılık gösterirler. ◙ Bu durum, hem antibiyotiklerin yapısına ve hem de mikroorganizmaların türüne göre değişebilir. ◙ Bu bakımdan; gerek koruyucu amaçla ve gerekse en önemlisi sağaltım için kullanılacak antimikrobial ilaçların spesifik hastalık etkenine karşı etkisinin çok iyi belirlenmesi ◙ ve böyle bir ilacın yeterli sürede, dozda ve bir program dahilinde kullanılması gereklidir.

ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE DÜZEYİNİN BELİRLENMESİ ◙ Bazen de spesifik etkenin izolasyonu ve identifikasyonu imkansız olabilir. ◙ Böyle durumlarda, çoğu zaman klinik belirtilere, anamneze ve diğer muayenelere dayanılarak yapılan bir teşhiste, geniş spektrumlu bir antibiyotik denenebilir. ◙ Etkenin izolasyon ve identifikasyonu yapılıp antibiyogram testi yapıldığında ya aynı antibiyotiğe devam edilir veya değişiklik yapılabilir.

ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE DÜZEYİNİN BELİRLENMESİ ◙ Her hangi bir enfeksiyonda çeşitli yöntemler kullanılarak en etkili antibiyotiği belirlemek gerekmektedir. ◙ Böylece, enfeksiyon daha etkili bir şekilde tedavi edilmektedir. ◙ Ayrıca, hastalık daha ekonomik olarak tedavi edilmiş ◙ ve bilinçsiz antibiyotik kullanmaktan kaynaklanan antibiyotiklere karşı direnç gelişimi de önlenmiş olunur. ◙ Ancak şu unutulmamalıdır ki; hiçbir bakterinin herhangi bir antibiyotiğe olan in vitro duyarlılığı, antibiyotiğin in vivo etkisi ile birebir örtüşmeyebilir.

ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE DÜZEYİNİN BELİRLENMESİ • Bakterilerin antibiyotiklere duyarlılığın saptanmasında, yaygın olarak kullanılan, başlıca 2 yöntem vardır: 1)Tüp Dilüsyon Yöntemi 2)Disk Diffüzyon Tekniği

ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE DÜZEYİNİN BELİRLENMESİ 1)Tüp Dilüsyon Yöntemi 1. Antibiyotiklerim MİK ve MLK değerlerini belirlemek için uygulanır. 2. Bu amaçla, Mueller-Hinton buyyonunda antimikrobial ilacın 2 veya 10 katlı dilusyonları yapılarak gittikçe azalan yoğunlukta ilaç içeren dilusyonları elde edilir. Örn. ilaç 1 ml'de 256 µg'dan başlayarak, 256, 128, 64, 32, 16, 8, . 4, 2, 1, 0. 5, 0. 25, 0. 12 µg/ml giderek azalan şekilde iki katlı sulandırılır.

ANTİMİKROBİYAL AKTİVİTE DÜZEYİNİN BELİRLENMESİ 1)Tüp Dilüsyon Yöntemi 3. Üzerine test edilecek bakterinin taze sıvı kültüründen (18 -24 saatlik) 0. 1 ml ekilerek uygun ısı ve sürede (37ºC, 18 -24 saat) inkübe edilir. 4. Tüplerdeki üreme gözle değerlendirilir. 5. Böylece üremenin olmadığı son dilusyon MİK değeri olarak kabul edilir.

0. 1 ml µg/ml 256 128 64 32 16 8 MİK 4 2 1 0. 5 0. 25

Antimikrobiyal Aktivite Düzeyinin Belirlenmesi 1)Tüp Dilüsyon Yöntemi ◙ Üremenin olmadığı bu son dilusyondan alınan 0. 1 ml. miktarındaki inokulum 10 ml sıvıbesiyerine (veya agara) ekilerek uygun bir süre (37ºC, 18 -24 saat) inkubasyonda tutulur. ◙ Tüpte üremenin olmaması MLK değerini, eğer tüpte üreme varsa MIK değerini yansıtır.

Antimikrobiyal Aktivite Düzeyinin Belirlenmesi 1)Tüp Dilüsyon Yöntemi • Agarda ya bazı koloniler meydana gelecek veya hiç koloni oluşmayacaktır. • Koloni oluşursa MİK değerini, oluşmazsa MLK değerini belirler. • Ancak, antibiyotik, inokulum ile birlikte agar yüzeyine aktarılacağından etkisi devam edebilir ve koloni oluşmayabilir. Bu nedenle broth kültürü daha uygundur.

Antimikrobiyal Aktivite Düzeyinin Belirlenmesi 2)Disk Diffüsyon Tekniği (Kirby-Bauer yöntemi ) 1. Test edilecek bakterinin taze sıvı kültüründen 0. 1 ml alınarak uygun katı besiyerine (Mueller-Hinton agar ) ekilir. 2. Oda ısısında kuruması sağlandıktan sonra (510 dakika) eşit aralıklarla antibiyotik diskleri yerleştirilir. 3. Uygun ısı ve sürede (37ºC, 18 -24 saat) inkübe edilerek, disklerin etrafındaki üreme durumu kontrol edilir.

Taze Sıvı Kültür

Antimikrobiyal Aktivite Düzeyinin Belirlenmesi 2)Disk Diffüsyon Tekniği (Kirby-Bauer yöntemi ) 3. Buna göre antibiyotikler duyarlı (S), orta duyarlı (I) veya dirençli (R) olarak kaydedilir. 4. Disk diffusyon yöntemi az masraflı, az zahmetli ve kolay uygulanırlığı yanı sıra, 5. bir petri kutusunda 5 -6 (10 -12) antibiyotiğe karşı duyarlılığı belirlemek ve en etkili olan ilacı saptamak mümkündür. Bu nedenle çok fazla tercih edilmektedir.