Anerobik kltr yntemleri Do Dr Arzu FINDIK Anerobik

Anerobik kültür yöntemleri Doç. Dr. Arzu FINDIK

Anerobik kültür yöntemleri Oksijensiz, sadece %20 karbon dioksit Anaerobiyozis oluşturmak için: Hava geçirmeyen kapalı bir kapta“anaerobik jar” (Mc. Intosh & Filde’s jar) Anaerobik Gas. Pak metot (Gaz Üreten Torbacıklar; inorganik karbonat, aktif karbon, askorbik asit ve su içeren bir reaktif torbacığından oluşur. ) Boşaltma- değiştirme metodu Anaerobic besi yeri kullanarak (indirgeyici maddeler içeren)

Metal ve Plastik Jarlar

Gaspak

Boşaltma-değiştirme Önceden var olan havanın kavanozdan boşaltılması ve hidrojen ve karbon dioksitin doldurulmasıyla gerçekleştirilir. Pleyt ve paladyum katalizörü jar içine konarak ağzı sıkıca kapatılır paladyum katalizörü kiti içerisindeki bikarbonat ve asit içeren kısmın CO 2, sodium borhidrat içeren kısmın ise H 2 oluşturması ile; palladium katalizörlüğünde ortamda var olabilecek O 2 kit tarafından oluşturulan H 2 ile birleşerek H 2 O oluşmakta, yine kit tarafından oluşturulan CO 2 ile de ortamın anaerobik olması sağlanmaktadır

Boşaltma-değiştirme Kalan hava (önceden var olan oksijen) vakum pompası ile boşaltılır İlk hidrojen gazı (%90), ardından karbon dioksit geçirilir ve inkube edilir

Anaerobik sıvı besi yeri Robertson’s Cooked Meat (RCM) Broth: Pişmiş et partikülleri oksijeni absorbe eden indirgeyici ajan olarak kullanılır Anaerobikler ete saldırırlar– proteolitik Örn; Cl. tetani Anaerobikler etteki karbonhidratlara saldırır– sakkarolitik Örn; Clostridium perfringens

Tiyoglikolat besi yeri Tiyoglikolat oksijeni absorbe eden indirgeyici ajan olarak kullanılır. Bakteriyel üreme bulanıklık ile belirlenir

Diğer metotlar Alkali pirogallol –oksijeni absorbe eder n Pirogallik asit, büyük bir test tüpündeki sodyum hidroksit solüsyonuna ilave edilir ve hava geçirmez jarlar içine konur. n

Kalite kontrol için İşlemin başarılı olup olmadığını kontrol için: Kimyasal indikatörler: n Metilen mavisi indikatörü-indirgenince beyaza döner; anaerobiyozis sürecinde. Biyolojik indikatörler: n Pseudomonas aeruginosa ( aerobik bakteri) anaerobiyozis oluşmadıysa üreyecektir n

Mumlu jar metodu