Analisis Vitamin dan Hormon Prof Dr Sudibyo Martono

Analisis Vitamin dan Hormon Prof. Dr. Sudibyo Martono, M. S. , Apt.

Vitamin C Nikotinamid Vitamin B 1. HCl Vitamin B 12 VIT-HOR 2

Vitamin VIT-HOR 3

Multivitamin Vit. C Vit. B 2 Vit. B 1 Niacin Vit. B 6 Niacinamid Folic Acid VIT-HOR 4

Pemisahan Vitamin-Vitamin Yang Larut Air [ ion-pairing reagents ] VIT-HOR 5

Kolom VIT-HOR 6

Gambar: 1 VIT-HOR 7

Ion Pair Reagent Alkylamines VIT-HOR Alkylsulfonates 8

Vitamin B-12 VIT-HOR 9

Vitamin B-12 Untuk Zat Tunggal, dapat dianalisis secara: Spektrofotometri UV atau Vis VIT-HOR 10

HPLC Multivitamin VIT-HOR 11

Kromatogram HPLC VIT-HOR 12

Hasil Pemisahan HPLC VIT-HOR 13

Vitamin C = Ascorbic Acid VIT-HOR 14

Metode Penetapan Kadar Zat Tunggal v Titrasi Secara Iodimetri (Redok) v Titrasi dengan Diklorofenolindofenol (DCIP) VIT-HOR 15

Pen. Kadar Vitamin C Netralisasi [ Iodimetri ] v Timbang seksama lebih kurang 400 mg, larutkan dalam campuran 100 m. L air dan 25 m. L asam sulfat 2 N, tambahkan 3 m. L kanji LP. Titrasi segera dengan iodium 0, 1 N LV. v Kesetaraan: - Satu (1) m. L iodium 0, 1 N setara dengan 8, 806 mg C 6 H 8 O 6 [ Vitamin C ] VIT-HOR 16

Pen. Kadar Vitamin C [ Iodimetri ] BM = 176, 13 Satu (1) m. L iodium 0, 1 N setara dengan 8, 806 mg C 6 H 8 O 6 [ Vitamin C ] VIT-HOR 17

Metode Diklorofenolindofenol [ DCIP ] Vitamin C Ascorbic Acid Dehydroascorbic Acid HSCH 2 CH(SH)CH 2 OH : 2, 3 -dithiol-Propanol Reducing agent and converts dehydroascorbic acid to ascorbic acid VIT-HOR 18

Titration Method for Reduced Vitamin C 1. Extract with metaphosphoric acid (HPO 3) in HOAC. 2. Titrate with 2, 6 -dichloroindophenol (blue). At end point, rose pink (2, 6 -dichloroindophenol in acidic condition). VIT-HOR 19

Oxidation and Reduction of Ascorbic Acid 2, 6 -dichloroindophenol HO OH + H H O H 2 C Cl O O N O OH Cl Blue Color Cl O O + H H O H 2 C O O NH HO OH Cl Pink color in acidic condition Extra oxidized indophenol form in the absence of ascorbic acidic gives pink color VIT-HOR 20 at end point

Calculation for Reduced Vitamin C A = ml of 2, 6 -dichloroindophenol for sample titration B = ml of 2, 6 -dichloroindophenol for blank F = mg of ascorbic acid equivalent to 1 ml of indophenol standard solution V = Initial assay solution volume E = Number of grams X = Volume sample aliquot titrated VIT-HOR 21

Vitamin B 1 HCl VIT-HOR 22

Vitamin B 1. HCl TBA Metode Penetapan Kadarnya: Titrasi dengan Na. OH Titrasi Bebas Air (dengan HCl. O 4) Titrasi Argentometri

Vitamin B-1 HCl v Titrasi Bebas Air (TBA) dengan HCl. O 4, dalam asetat glasial, indikator p-Naftol benzein atau Quinaldin merah. -Adanya Cl, dihilangkan/diendapkan dg pe + an (CH 3 COO)2 Hg. Mengapa ? Kesetaraan: 1 m. L 0, 1 N HCl. O 4 0, 1 x BM/2 mg Vit B 1 VIT-HOR 24

Vitamin B 1 HCl v Klorin total dalam Vitamin B 1 dapat ditentukan dengan: -melarutkan dalam air + asam nitrat encer + larutan Ag. NO 3 >>>, ttt. Endapan yang terbentuk disaring, dicuci dengan air. Cairan hasil cucian (sisa Ag. NO 3) dititrasi dengan NH 4 CNS. Kesetaraan: 1 m. L 0, 1 N Ag. NO 3 35, 46 mg klorin VIT-HOR 25

Vitamin B 1 HCl v Klorin sebagai hidroklorid ditentukan dengan cara titrasi menggunakan 0, 1 N Na. OH, indikator biru brom timol. Kesetaraan: 1 m. L 0, 1 N Na. OH 35, 46 mg klorin VIT-HOR 26

Thiamin HCl VIT-HOR 27

Tiokrom Fluorescensi Biru

PK. Obat Secara Spektrofluorometri

PK. Riboflavin

Riboflavin nm 222 942 267 873 371, 5 277 445 324

VIT-HOR 32

VIT-HOR 33

Riboflavin PK. Spektrofluorometri dalam asetat 5 %, eksitasi = 445 nm = 530 nm emisi (Fluorescensi : hijau kekuningan)

Riboflavin (µg/m. L) Intensitas fluorescensi 0, 10 5, 8 0, 20 12, 2 0, 40 22, 3 0, 80 43, 3 . . ? 15, 4 Y = 52, 9739 X + 1, 0348 ; r = 0, 999; = 88, 90 Kadar = 0, 27 (µg/m. L)

Riboflavin Bila intensitas fluorescensi dibagi : 100 Riboflavin (µg/m. L) Intensitas fluorescensi 0, 10 0, 20 0, 40 0, 80. . ? 0, 058 0, 122 0, 223 0, 433 0, 154 Y = 0, 5297 X + 0, 0104 ; r = 0, 999; = 27, 90 Kadar = 0, 27 (µg/m. L)

Tabel : Koef. Korelasi [r] db p 0, 10 0, 05 0, 02 0, 01 0, 001 1 0, 988 0, 997 0, 999 1, 000 2 0, 900 0, 950 0, 980 0, 999 3 0, 805 0, 878 0, 934 0, 959 0, 992 4 0, 729 0, 811 0, 882 0, 917 0, 974 5 0, 669 0, 754 0, 833 0, 874 0, 951 . . . 20 0, 360 0, 423 0, 492 0, 537 0, 652

Y=b. X+a Y X r db p = nilai respon = kadar senyawa baku = koefisien korelasi = derajad bebas = taraf kepercayaan / limit of confidence

db = n - 2 Literatur : Skoog, D. A. , 1985, Principles of Instrumental Analysis, Third Edition, Sounders College Publishing, New York. Harris, D. C. , 1987, Quantitative Chemical Analysis, Second Edition, W. H. Freemand Company, New York. Miller, J. C. and Miller, J. N. , 1988, Statistical for Analytical Chemistry, Second Edition, John Wiley & Sons, New York.

Labu Takar TC 20 OC VIT-HOR 40

Perlukah Metode Titrasi Di. Validasi ? ? ?

European Pharmacopoeia 6. 0 2008 (p. 514), 4. 2. 2 v Volumetric solution do not differ from the prescribed strength by more than 10 per cent. The molarity of the volumetric solution is determined by an appropriate number of titrations. The repeatability does not exceed 0. 2 per cent (relative standard deviation). v Misal, akan dibuat larutan baku 0, 1 N, Yang diperbolehkan : 0, 09 - 0, 11 [ RSD ≤ 0, 2 % ] VIT-HOR 42

Validasi Metode Titrasi 2005 VIT-HOR 43

Ermer and Miller, 2005, p. 327 VIT-HOR 44

Is the volumetric method to be validated ? 30

VIT-HOR 46

Hormon VIT-HOR 47

Kortison dan Hidrokrtison Kortison Hidrokortison Kelarutan dalam pelarut: Air : 1 : 5. 000 Etanol : 1 : 300 -350 Kloroform : 1 : 4 Sedikit larut dalam eter Kelarutan dalam pelarut: Air : 10. 000 Etanol : 1 : 230 Kloroform : sedikit larut Larut dalam dioksan VIT-HOR 48